Avaliação da resposta humoral e celular de camundongos BALB/C imunizados com a proteína rMSP1a obtida do isolado UFMG2 de Anaplasma marginale
| Autor: | Bruna Torres Silvestre |
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| Přispěvatelé: | Mucio Flavio Barbosa Ribeiro, Elida Mara Leite Rabelo, Deborah Aparecida Negrao Correa, Camila de Valgas e Bastos Castro |
| Jazyk: | portugalština |
| Rok vydání: | 2013 |
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| Zdroj: | Repositório Institucional da UFMG Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG) instacron:UFMG |
| Popis: | Anaplasmose bovina é uma doença causada pela bactéria gram-negativa intraeritrocitária Anaplasma marginale, transmitida biologicamente por carrapatos ou mecanicamente por moscas hematófogas. As proteínas de superfície (MSPs) de A. marginale, são importantes para a interação do patógeno com o hospedeiro, e constituem possíveis alvos vacinais contra essa doença. As proteínas MSP1a e MSP2 apresentam maior potencial como imunógenos, sendo a MSP1a considerada uma adesina de eritrócitos bovinos e células de carrapatos. Proteínas exógenas administradas isoladamente no organismo podem apresentar baixa biodistribuição ou serem rapidamente degradadas ou eliminadas. A utilização de carreadores constitui uma alternativa para aumentar a eficiência da distribuição e a apresentação do antígeno ao sistema imune. O objetivo deste trabalho foi avaliar a resposta imune humoral e celular de camundongos Balb/c imunizados com o fragmento recombinante da proteína MSP1a, do isolado UFMG2 de A. marginale em diferentes combinações. Um fragmento da MSP1a de 339bp, compreendendo a porção N-terminal, foi clonado em vetor pJexpress414. O produto da expressão foi purificado e a identidade da proteína foi confirmada por SDS-PAGE e Western Blot. Nanotubos de carbono de paredes múltiplas (MWNT) foram utilizados como molécula carreadora da rMSP1a na apresentação do antígeno ao sistema imune. Trinta e seis camundongos Balb/c, com idade de 6 a 8 semanas, foram divididos em seis grupos de seis animais cada (Não Imunizados, PBS, rMSP1a, MWNT, MWNT+rMSP1a e vacina completa (antígeno de A. marginale cultivado in vitro + MWNT+rMSP1a) e imunizados com três doses, via SC, intervaladas a cada 21 dias. Camundongos imunizados com a proteína rMSP1a, MWNT+rMSP1a e vacina completa produziram altos níveis de IgG anti-rMSP1a, mostrando que a ligação da rMSP1a aos MWNT não interferiu na sua conformação original. Entretanto, o grupo vacina completa apresentou títulos de anticorpos mais baixos do que os grupos rMSP1a e MWNT+rMSP1a. Não foi detectada resposta no grupo imunizado com MWNT livre. Esplenócitos dos animais imunizados com a ferramenta MWNT+rMSP1a apresentou uma maior capacidade proliferativa, além de maiores percentuais de linfócitos T CD4+/CD44+ e CD4+/CD62+. Níveis significativamente maiores de TNF- foram observados no grupo MWNT+rMSP1a em relação ao grupo PBS, e maior concentração de IL-10 foi observada no soro dos animais do grupo vacina completa. Estes resultados sugerem que a proteína rMSP1a associada a MWNT influenciou tanto no aumento da resposta de memória quanto na ativação de linfócitos. Bovine Anaplasmosis is a disease caused by the intra-erythrocytic rickettsia Anaplasma marginale, which is biologically transmitted by ticks and mechanically by hematophagous flies. Surface proteins (MSPs) of A. marginale, are important for the interaction of the pathogen with host and constitute potential vaccine targets against this pathogen. MSP1a and MSP2 have greater potential as immunogens, being consideredthe MSP1a a adhesin of bovine erythrocytes and tick cells. Isolated exogenous proteins administered into the body can have low biodistribution or are rapidly degraded or eliminated. The use of carriers would be an alternative for increasing the efficiency of distribution and presentation of the antigen to the immune system. The aim of thepresent study was to evaluate the humoral and cellular immune response of Balb/c mice immunized with the recombinant protein fragment MSP1a, originated from the A. marginale UFMG2 in different combinations. A fragment of 339bp MSP1a comprising the N-terminal region, was cloned into the expression vector pJexpress414. The expression product was purified and identity of the protein was confirmed by SDS-PAGE and Western Blot. Multiwalled carbon nanotubes (MWNTs) were used as a carrier molecule to the rMSP1a as antigen presentation to the immune system. Thirty-six Balb/c mice, aged 6 to 8 weeks, were divided into six groups of six animals each (non-immunized, PBS, rMSP1a, MWNT, MWNT+rMSP1a and complete vaccine (antigen of A. marginale cultivated in vitro + MWNT+rMSP1a) and immunized withthree doses, in 21 days intervals. Mice immunized with the protein rMSP1a, MWNT+rMSP1a and vaccine produced high levels of IgG anti-rMSP1a, showing that the binding of rMSP1a in MWNT did not interfere in its original conformation. However, the complete vaccine group presented antibody titers lower than groups rMSP1a and MWNT+rMSP1a. No response was detected response in the groupimmunized with free MWNT. Splenocytes of group MWNT+rMSP1a significantly proliferated upon stimulation with the protein and presented a higher percentage of CD4+/CD44 + and CD4 +/CD62 +. Significant levels of TNF- were observed in the group MWNT+rMSP1a compared to PBS group, and the highest concentration of IL-10 was observed in serum of the animals tested complete vaccine. These results suggestthat rMSP1a associated with MWNT may influence both the increased memory response as lymphocyte activation. |
| Databáze: | OpenAIRE |
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