Producción de fenilalanina hidroxilasa en lactobacillus plantarum como posible vehículo de entrega gastrointestinal
| Autor: | Ramírez Ángel, Aura María |
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| Přispěvatelé: | Alméciga Díaz, Carlos Javier |
| Jazyk: | Spanish; Castilian |
| Rok vydání: | 2016 |
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| Zdroj: | Repositorio Universidad Javeriana Pontificia Universidad Javeriana instacron:Pontificia Universidad Javeriana |
| Popis: | La fenilcetonuria (PKU) es la amlnoaddopatia más frecuentes entre los caucásicos, se produce debido a un defecto de la fenilalanina hidroxllasa (PAH), que cataliza la conversión de fenilalanina (Phe) en tirosina. Una PAH defectuosa provoca la acumulación de Phe. niveles altos de Phe resultan en generación del metabollto fenilpiruvato el cual tiene un efecto neurotóxlco, adiclonalmente Phe compite por los transportadores de aminoácidos grandes neutros en la barrera hematoencefállca de manera que su exceso evita la entrada de otros aminoácidos de este tipo haciendo que estos estén deficientes a nivel de sistema nervioso central lo que causa un déficit en la síntesis de algunos neurotransmlsores. El tratamiento para esta enfermedad Incluye dietas, que se deben mantener a lo largo de toda la vida y por tanto resultan incomodas para los pacientes, suplementación con tetrahidrobiopterlna. la cual depende de la mutación (no todas son sensibles), ó terapia de reemplazo enzimàtico administrada vía parenteral, la cual aún se encuentra en ensayos clínicos y presenta efectos adversos. El objetivo de este trabajo es evaluar proteínas fusión basadas en la PAH producidas en una cepa de L. plantarum. Estas proteínas incluyen una proteina fluorescente verde mejorada (EGFP), como reportero, y contienen péptidos para: 1) la secreción de lactobacllos. 2) el transporte a través de la barrera gastrointestinal, y 3) entrada a células hepáticas. Estos constructos se insertaron en el vector de expresión pSIP501. Las células de L. plantarum se transformaron por electroporaclón y la producción de las proteínas fusión fue evaluada por espectrofluorometría en el extracto crudo de los cultivos. Los mejores clones fueron escogidos para evaluar su extracto en células CaCo2 cultivadas en placas de Transwell (1x104 células por pozo) con el fin de determinar la capacidad de las proteínas para cruzar la membrana epitelial gastrointestinal. La cepa de L. plantarum produjo y secretó con éxito las proteínas fusión recombinantes. Estas proteínas fueron capaces de cruzar una monocapa totalmente diferenciado de las células CaCo2. Phenylketonuria (PKU) is the most frequent aminoacidopathy, it occurs due to a defect in the enzyme phenylalanine hydroxylase (PAH), which converts phenylalanine (Phe) to tyrosine (Kim, Erlandsen et al.). Defective PAH causes accumulation of Phe, which has neurotoxic effects and leads to dermatological, behavioral, and neurocognitive problems if diagnosis and treatment are not established early in life. Treatment for this disease consists in life-long diets that are hard for patients to maintain and supplementation with tetrahydrobiopterin depending on the mutation (not all are responsive). The aim of this work is to evaluate the production of different fusion proteins based on PAH in a L. plantarum strain and their capacity to cross the gastrointestinal barrier using CaCo2 cells as a model. These fusion proteins included an enhanced green fluorescent protein (EGFP), and peptides for: 1) secretion from Lactobacilli, 2) transport across gastrointestinal membrane, and 3) cell capture by liver cells. The L. plantarum strain successfully produced and secreted the recombinant fusion proteins that were able to cross the CaCo2 cells monolayer, specially the one containing the CSK peptide as gastrointestinal signal. Magíster en Ciencias Biológicas Maestría |
| Databáze: | OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
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