O tratamento com TKI-258 aumenta a sinalização RhoA/ROCKs e leva ao aumento de apoptose em carcinoma epidermoide oral in vitro

Autor: CARNEIRO, Anna Cecília Dias Maciel
Přispěvatelé: CREMA, Virgínia Oliveira
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2020
Předmět:
Zdroj: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFTM
Universidade Federal do Triangulo Mineiro (UFTM)
instacron:UFTM
Popis: Introdução: Recentemente terapias para carcinoma epidermoide oral tendo alvo para vias de sinalização moleculares são as mais utilizadas. TKI-258 é um inibidor simultâneo dos receptores tirosina quinase FGFRs, VEGFRs e PDGFRs. Essas vias de sinalização ativam proteínas, como as GTPases Rho que contriubem para a tumorigênese, atuando em diferentes processos biológicos, como apoptose. Objetivos: Este estudo avaliou o efeito do tratamento com TKI-258 sobre a apoptose, envolvendo as GTPases Rho e suas efetoras ROCKs e PAKs em células SCC-4 de carcinoma epidermoide oral. Material e Métodos: Marcadores de morte celular e apoptose foram analisados em células SCC-4 controle e tratadas com TKI-258 por citometria de fluxo. O envolvimento das GTPases Rho e das efetoras ROCKs na indução da apoptose pelo TKI-258 foi avaliado por meio da quantificação de PARP clivada. Também foram realizadas análises de expressão gênica das GTPases Rho e de algumas de suas efetoras. Resultados: O tratamento com TKI-258 levou a um aumento significativo na morte celular (7-AAD) e apoptose (Anexina V e PARP clivado). Quando as GTPases Rho foram estimuladas com LPA e inibidas com Toxina Clostridium difficile, o percentual de células apoptóticas aumentou e diminuiu, respectivamente. O tratamento com TKI-258 combinado com LPA e Toxina A teve um efeito similar, aumentando e diminuindo a apoptose, respectivamente. O tratamento com TKI-258 aumentou significativamente a expressão gênica de RhoA, enquanto que em RhoB, RhoC, Rac1 e Cdc42 diminui significativamente. Os inibidores de ROCKs (Y-27632 e HA-1077) reduziram a apoptose comparado com o controle. TKI-258 combinado com Y-27632 ou HA-1077 levou ao aumento da apoptose em comparação apenas com os inibidores. O tratamento com TKI-258 levou a um aumento na expressão dos genes ROCK1 e ROCK2 e uma diminuição na expressão dos genes PAK1 e PAK2. Conclusão: O TKI-258 estimulou a apoptose em células SCC-4 de carcinoma epidermoide oral. Possivelmente, GTPases Rho e suas efetoras ROCKs participam da via de sinalização inibida pelo TKI-258. Terapias com inibidores multialvos, como o TKI-258, podem ser alternativas promissoras para o tratamento clínico do carcinoma epidermoide oral. Background: Recently therapies for oral squamous cell carcinoma targeting molecular pathways are the most useful. TKI-258 is a simultaneous inhibitor of tyrosine kinase receptors FGFRs, VEGFRs, and PDGFRs. These pathways activate proteins such as Rho GTPases that contribute to tumorigenesis, performing different biological processes, as apoptosis. Objectives: This study evaluated the effect of treatment with TKI-258 on apoptosis, involving Rho GTPases and their effectors ROCKs and PAKs in SCC-4 cells of oral squamous cell carcinoma. Materials and Methods: Markers of cell death and apoptosis were analyzed in control and TKI-258 treated SCC-4 cells by flow cytometry. The involvement of Rho GTPases and the effectors ROCKs in the induction of apoptosis by TKI-258 was evaluated by quantification of cleaved PARP. Also gene expression analysis of Rho GTPases and some of their effectors was performed. Results: The treatment with TKI-258 led to a significant increase in cell death (7-AAD) and apoptosis (Annexin V and cleaved PARP). When Rho GTPases were stimulated with LPA and inhibited with Toxin A Clostridium difficile, the percentage of apoptotic cells increased and decreased, respectively. The treatment with TKI-258 combined with LPA and Toxin A had a similar effect, increasing and decreasing apoptosis, respectively. Treatment with TKI-258 significantly increased RhoA gene expression, while RhoB, RhoC, Rac1 and Cdc42 decreased significantly. ROCKs inhibitors (Y-27632 and HA-1077) reduced apoptosis compared with control. TKI-258 combined with Y-27632 or HA-1077 led to an increase in apoptosis compared with inhibitors only. Treatment with TKI-258 led to an increase in ROCK1 and ROCK2 gene expression, and a decrease in PAK1 and PAK2 gene expression. Conclusion: TKI-258 stimulates apoptosis in SCC-4 cells of oral squamous cell carcinoma. Possibly, Rho GTPases and their effectors ROCKs participate in the signaling pathway inhibited by TKI-258. Therapies with multi-target inhibitors, such as TKI-258, may be promising alternatives for the clinical treatment of oral squamous cell carcinoma. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG
Databáze: OpenAIRE
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