Papel de PI3K na invasão celular e maturação de fagolisossomos de L. (L.) amazonensis
| Autor: | Guimarães, Renata Junqueira Rezende |
|---|---|
| Přispěvatelé: | Silva, Cláudio Vieira da, Pena, Janethe Deolina de Oliveira, Silva, Deise Aparecida de Oliveira, Napolitano, Danielle Reis, Oliveira, Heliana Batista de, Rodrigues, Rosângela Maria |
| Jazyk: | portugalština |
| Rok vydání: | 2009 |
| Předmět: | |
| Zdroj: | Repositório Institucional da UFU Universidade Federal de Uberlândia (UFU) instacron:UFU |
| Popis: | Cutaneous leishmaniasis caused by Leishmania (L.) amazonensis is largely distributed throughout the country and can manifest as severe and disseminated lesions in man and other animals. During microorganism invasion phagocytes are activated and one of the signs of this activation is the phosphorylation of specific substrates by the enzyme phosphatidylinositol-3- kinase (PI3K), which is in its turn activated by a variety of extracellular signals, generating lipid products that will serve as mediator in signal transduction downstream. During parasite invasion of the host cells there is recruitment of cytoskeleton proteins to form a phagosome, followed by fusion with lysosomes to generate the phagolysosome, where the parasites will thrive. Modulation of PI3K signaling pathways by parasites are important strategies for the establishment of the infection and intracellular survival of intracellular parasites. In this study we aimed to investigate the maturation of the phagolysosome of L. (L.) amazonensis through the labeling of F-actin and LAMP-1, as well as to determine the role of PI3K on the invasion process by L. (L.) amazonensis. Murine peritoneal macrophages treated or not with wortmannin (an inhibitor of the PI3K pathway) were infected with L. (L.) amazonensis promastigotes. To validate the role of this pathway by this species of Leishmania, macrophages were transfected with GFP-PLC-δ-PH plasmid, which has homology with PI(4,5)P2, a component of the PI3K pathway, after which they were infected. Our results demonstrated that, during the maturation of L. (L.) amazonensis phagosomes, there was initially F-actin recruitment to the nascent phagosome/endosome, which disappeared after fusion with lysosomes, as shown by the recruitment of LAMP-1, a lysosomal marker. The processes of invasion and lysosomal fusion of L. (L.) amazonensis demonstrated a clear dependency of PI3K activity, as it was demonstrated by the inhibition of these processes by the PI3K inhibitor wortmannin. A leishmaniose tegumentar, causada por Leishmania (L.) amazonensis, está amplamente distribuída em todo território nacional, manifestando-se como lesões graves disseminadas no homem e animais. Durante a invasão de microorganismos, células fagocíticas são ativadas, sendo que um dos eventos sinalizadores é a fosforilação de substratos pela enzima fosfatidilinositol- 3-quinase (PI3K), que mediante uma ampla variedade de estímulos extracelulares, gera produtos lipídicos específicos que propagam sinais intracelulares através de proteínas mediadoras subseqüentes, gerando fluxos secundários de sinalização. No processo de invasão, ocorre o recrutamento do citoesqueleto e fusão com lisossomos para a formação do fagolisossomo. A modulação, por patógenos, da sinalização dependente da via PI3K na célula hospedeira é uma importante estratégia para estabelecimento da infecção e sobrevivência intracelular destes organismos. Objetivamos estudar a maturação de fagolisossomos de L.(L.) amazonensis através da marcação de F-Actina e Proteína de Membrana Associada a Lisossomos (LAMP-1), bem como o papel da PI3K no processo de invasão celular e maturação dos fagolisossomos de L.(L.) amazonensis. Macrófagos peritoneais murinos, tratados ou não com wortmanina (um inibidor da via PI3K), foram infectados com promastigotas de L.(L) amazonensis. Para validar a participação desta via na invasão por esta espécie de Leishmania, os macrófagos foram transfectados com plasmídeo GFP-PLC-δ-PH, com homologia com a região de PI(4,5)P2, um componente da via de fosforilação PI3K, após o qual foram infectados. Nossos resultados demonstraram que durante o processo de maturação de fagolisossomo de L.(L.) amazonensis, há primeiramente um recrutamento de Factina para formação do fagossomo/endossomo precoce, sendo que a F-actina despolimeriza quando há fusão com lisossomos, evidenciado pelo recrutamento de LAMP-1, marcador de lisossomos. Os processos de invasão e fusão lisossomal de L.(L.) amazonensis demonstraram clara dependência da atividade de PI3K, evidenciado pela diminuição desses processos pelo inibidor de PI3K, a wortmanina. Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas |
| Databáze: | OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
|