Avaliação antitumoral da terapia fotodinâmica com azul de metileno em células neoplásicas mamárias

Autor: Souza, Álvaro Carneiro de
Přispěvatelé: Paoli, Flávia de, Rocha, Vinicius Novaes, Sergio, Luiz Philippe da Silva
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2022
Předmět:
Zdroj: Repositório Institucional da UFJF
Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)
instacron:UFJF
Popis: A terapia fotodinâmica (TFD) é uma alternativa de tratamento para o câncer de mama, demonstrando seletividade e importante citotoxicidade aos tecidos malignos. Este tipo de terapia envolve o uso de dois componentes não tóxicos: uma substância fotossensibilizante e uma fonte de luz (como lasers de baixa potência). Em combinação, eles podem induzir efeitos celulares e teciduais por meio de processos dependentes de oxigênio, levando as células tumorais à morte por necrose, apoptose e autofagia. Assim, o objetivo foi avaliar a atividade antitumoral da terapia fotodinâmica utilizando células tumorais mamárias em modelos experimentais in vitro. A linhagem celular de tumor de mama 4T1 foi cultivada em meio RPMI suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB) e 1% de antibiótico a 37°C e 5% de CO2. O azul de metileno (AM) foi dissolvido em meio RPMI nas concentrações 5, 10, 15, 20, 25, 50, 100 e 150 µM, filtrado e as células foram incubadas durante 30 min a 37°C. Logo após esse período de incubação, a solução de AM foi removida, as placas lavadas eu um novo meio RPMI adicionado. A irradiação foi realizada com laser vermelho de baixa potência (660nm - AsGaAl), perpendicularmente e pontualmente, nos seguintes parâmetros: potência 100mW, densidade de energia 100 Jcm-2 , energia por ponto 2,8 J, modo de emissão de luz contínua e tempo de exposição 28s. Após a irradiação, viabilidade celular foi testada através de MTT, a migração celular foi realizada pelo método wound healing e níveis relativos de mRNA através de real time PCR. Os resultados de viabilidade celular indicam que as concentrações de AM de 5 a 50 µM não foram tóxicas para as células 4T1, enquanto as concentrações de 100 e 150 µM apresentaram citotoxicidade. Por outro lado, células 4T1 incubadas com AM e irradiadas com laser de baixa potência apresentaram redução da viabilidade e na migração celular na concentração de 50 µM. Níveis relativos de mRNA para caspase-6 não foram alterados nos tratamentos testados; já os níveis para Bcl-2 foram reduzidos após TFD 25 µM. Em conclusão, concentrações superiores a 100 µM de AM no tempo de incubação de 30 min geram efeitos citotóxicos nas células, reduzindo a viabilidade. Concentração de 50 µM demonstrou diminuição na viabilidade e migração celular após a TFD, indicando uma boa dose-resposta do tratamento para esse tipo de célula. Photodynamic therapy (PDT) is an alternative treatment for breast cancer, demonstrating selectivity and important cytotoxicity to malignant tissues. Such therapy involves the use of two non-toxic components: a photosensitizing substance and a light source (such as low-power lasers). In combination, they can induce cellular and tissue effects through oxygen-dependent processes, leading tumor cells to death by necrosis, apoptosis and autophagy. Thus, the objective was to evaluate the antitumor activity of photodynamic therapy using breast tumor cells in experimental models in vitro. 4T1 breast tumor cell line was cultured in RPMI medium supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS) and 1% antibiotic at 37°C and 5% CO2. Methylene blue (MB) was dissolved in RPMI medium at concentrations 5, 10, 15, 20, 25, 50, 100 and 150 µM, filtered and the cells were incubated for 30 min at 37°C. Shortly after this incubation period, the MB solution was removed, the plates washed and a new RPMI medium added. Irradiation was performed with a low power red laser (660nm - AsGaAl), perpendicularly and punctually, in the following physical parameters: power 100mW, energy density 100 Jcm-2 , energy per spot 2.8 J, continuous light emission mode and exposure time 28s. After irradiation, cell viability was tested by MTT, cell migration was performed by wound healing method and mRNA relative levels by real time PCR. Cell viability results indicate that MB concentrations from 5 to 50 µM were not toxic to 4T1 cells, while concentrations of 100 and 150 µM showed cytotoxicity. On the other hand, 4T1 cells incubated with MB and irradiated with low power laser showed reduced viability and cell migration at 50 µM concentration. Caspase-6 mRNA relative level was not altered in the treatments tested; Bcl-2 mRNA relative level was reduced after PDT 25 µM. In conclusion, concentrations up to 100 µM and 30 min of incubation time generate cytotoxic effects on cells, reducing viability. Concentration of 50 µM demonstrated a decrease in cell viability and migration after PDT, indicating a good dose-response treatment for this cell type
Databáze: OpenAIRE
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