Desenvolvimento e aplicação de uma metodologia para varredura de polimorfismo relacionado à resistência aos Benzimidazóis em Ancylostoma caninum
| Autor: | Luis Fernando Viana Furtado |
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| Přispěvatelé: | Elida Mara Leite Rabelo, Ana Cristina Passos de Paiva Bello, Carlos Renato Machado, Ricardo Nascimento Araujo |
| Jazyk: | portugalština |
| Rok vydání: | 2014 |
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| Zdroj: | Repositório Institucional da UFMG Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG) instacron:UFMG |
| Popis: | Ancylostoma caninum é considerado um importante parasito de canídeos, além de manifestar grande relevância zoonótica como agente de enterite eosinofílica e infecções cutâneas em humanos. A administração da droga em massa, sobretudo com benzimidazóis, corresponde ao principal método de controle dessa parasitose. Todavia, essa estratégia é considerada vulnerável por selecionar cepas de parasitos resistentes à droga. Mutações nos códons 167, 198 e 200 do gene da -tubulina isotipo 1 já foram associadas com resistência aos benzimidazóis em alguns nematódeos, de modo que a mutação no códon 200 foi detectada inclusive em ancilostomídeos de humanos, mas não relatada ainda em A. caninum. O objetivo desse trabalho foi realizar uma varredura de polimorfismos nos códons 198 e 200 do gene da -tubulina isotipo 1 de A. caninum coletados em duas diferentes regiões do Brasil. Foram coletados 162 vermes de cães provenientes de Centros de Controle de Zoonoses da cidade de Belo Horizonte, Minas Gerais, e 149 de Teresina, Piauí. Para análise do códon 200, foi desenvolvida uma ferramenta molecular baseada em ARMS-PCR, e para tanto, controles foram construídos tanto para ausência da mutação, por meio de PCR convencional, como para a presença da mutação, pela técnica de Megaprimer-PCR. Embora em baixa frequência (0,8%), a mutação no códon 200 foi observada apenas em vermes coletados em Minas Gerais, enquanto que as amostras provenientes do Piauí não apresentaram mutação para nenhum dos dois códons analisados. Um total de 75 amostras foram submetidas a sequenciamento, para validação da técnica padronizada e para varredura do códon 198. O sequenciamento validou a técnica desenvolvida e não mostrou correlação entre as mutações. Conclui-se que existe baixa frequência da mutação no códon 200 na população de A. caninum analisada. Esse é o primeiro relato que determina a presença dessa mutação em populações da espécie em questão, reforçando a necessidade de monitoramento de cepas de ancilostomídeos resistentes aos benzimidazóis, haja vista a emergência do problema em outras espécies. Ancylostoma caninum is considered an important parasite of canids, and presents great relevance as zoonotic agent of eosinophilic enteritis and skin infections in humans. The mass drug administration, especially with benzimidazoles, corresponds to the main method of control of the disease caused by members of the hookworms family. However, this strategy is considered vulnerable as it can lead to selection of drug resistant strains. Mutations in codons 167, 198 and 200 of isotype 1 -tubulin gene have been associated with benzimidazoles resistance in some nematodes. The mutation at codon 200 has been detected in humans hookworm, but so far has not being reported in A. caninum. The aim of this study was to perform a scan of polymorphisms at codons 198 and 200 of isotype 1 -tubulin gene in A. caninum collected from two different regions of Brazil. Were collected 162 worms from dogs originated from Centers for Zoonosis Control from the city of Belo Horizonte, Minas Gerais, and 149 of Teresina, Piauí. For analyze the codon 200, a molecular tool based on ARMS-PCR has been developed. For that controls for the absence of mutation, using conventional PCR, and for the presence of mutation using Megaprimer-PCR technique, were developed. Although at low frequency (0.8%), the mutation at codon 200 was observed only in worms collected in Minas Gerais, while samples from Piauí showed no mutations. A total of 75 samples were subjected to sequencing to validate the technique developed and also to scan the region comprising the codon 198. The sequencing validated the technique developed and showed no correlation between the mutations. We conclude that there is a low frequency of mutation at codon 200 in the population of A. caninum analyzed. This is the first report that determines the presence of the mutation at codon 200 in this specie population. These data reinforce the need for monitoring for benzimidazole resistant hookworms strains, given the emergence of the problem in other species. |
| Databáze: | OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
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