Caracterização de marcadores moleculares com aplicabilidade para identificação de duas espécies de peixe com interesse forense: Prochilodus argenteus e Prochilodus costatus
| Autor: | Aline Torres de Azevedo Chagas |
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| Přispěvatelé: | Evanguedes Kalapothakis, Maria Bernadete Lovato, Sordaini Maria Caligiorne |
| Jazyk: | portugalština |
| Rok vydání: | 2015 |
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| Zdroj: | Repositório Institucional da UFMG Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG) instacron:UFMG |
| Popis: | A crescente preocupação com as questões ambientais, aliada ao advento de leis que procuram proteger os recursos naturais, tem criado uma nova demanda na área das ciências forenses que trata das perícias ambientais. Em relação às atividades de pesca, existem diversas cartas legislativas em vigor que buscam proteger os recursos pesqueiros. Em contrapartida, a correta identificação de espécimes apreendidos em ocorrências de pesca ilegal ainda é feita de modo precário. Dessa forma, seria desejável o estabelecimento de protocolos simplificados que permitam a correta identificação de materiais apreendidos como forma de fortalecer as ações de fiscalização e, posteriormente, a prova no meio jurídico. Nesse aspecto, as técnicas moleculares podem oferecer grande ajuda através do estabelecimento de marcadores espécie-específicos, que permitam afirmar se o material questionado é proveniente, de fato, de espécie cuja pesca não é permitida. O presente trabalho objetiva caracterizar marcadores moleculares para as espécies Prochilodus argenteus e Prochilodus costatus, ambas de grande importância ecológica e econômica na região da bacia hidrográfica do rio São Francisco. Para tanto, foi feito o sequenciamento de DNA genômico das duas espécies, montagem de novo das reads geradas, montagem e anotação das sequências de DNA mitocondrial e comparação com a sequência de DNA mitocondrial de outra espécie do mesmo gênero: Prochilodus lineatus. Foram selecionados marcadores mitocondriais gênero-específicos e espécie-específicos e o desenho de primers foi feito levando-se em conta a possibilidade de identificação de gênero e espécie através da análise dos amplicons gerados em reação em cadeia da polimerase (PCR). Foram identificados um par de primers gênero-específicos, que apresentaram boa sensibilidade e especificidade na detecção de DNA do gênero Prochilodus. Quanto aos primers espécieespecíficos, foi encontrado um par que apresentou amplificação apenas para DNA de P. argenteus. O presente trabalho também obteve sucesso na extração de DNA de petrechos de pesca (uma rede e uma tarrafa) que foram sabidamente utilizados para coleta de espécimes de P. argenteus e P. costatus. Através de PCR utilizando marcadores mitocondriais, foi possível detectar a presença de material genético de Prochilodus no DNA extraído dos petrechos de pesca. Os dados obtidos a partir do sequenciamento de P. argenteus e P. costatus também permitiram a identificação de dezenas de milhares de marcadores microssatélites, que ainda precisam ser avaliados quanto à aplicabilidade para a identificação de espécies e para estudos de diversidade. A tecnologia apresentada no presente trabalho possui potencial para ser expandida para outras espécies e para ser aplicada em estudos de ecologia molecular, genética de conservação e na área forense como meio de determinação da materialidade de delitos e, consequentemente,fortalecimento da prova pericial no meio jurídico. The increasing concern about environmental issues added to specific legislation aiming inhibition of environmental damage brought give rise to new challenges for forensic science. Regarding fishing activities, there are several laws with purpose of protecting fishing resources. On the other hand, the correct identification at species-level of samples seized in enforcement actions is far from accurate. Thus, it became extremely important the establishment of techniques that enable the correct identification of the seized samples, ideally through easy handling protocols. This would strength the enforcement actions and the juridical proof. Considering this, molecular techniques can provide species-specific markers for unambiguously identification. This information is important in juridical process for determining if seized samples are indeed one of the ones of prohibited fishing. The aim of this study was to characterize molecular markers for two fish species: Prochilodus argenteus and Prochilodus costatus. Both species present great ecological and economic relevance in São Francisco River Basin. The genomic DNA of both species were sequenced and a de novo assembly was carried out, as well as the annotation of mitochondrial DNA sequences and its comparison to the mitogenomes of a closely related species: Prochilodus lineatus. Genus-specific and species-specific markers were selected considering its potential ability of genus and species identification based just on the PCR products sizes through electrophoresis gel. One pair of genus-specific primers presented highly sensitivity and specificity for Prochilodus genus. Regarding species-specific primers, one pair proved to be specific for P. argenteus. The present study was also able to extract DNA from fishing artefacts used for P. argenteus and P. costatus capture. Prochilodus DNA was detected in those artefacts through PCR using mitochondrial markers. Genomic DNA sequencing also enabled the identification of dozens of thousands microsatellites markers. Later, they are going to be evaluated for species identification and genetic diversity studies. The methodology presented in this project can be potentially applied to other species and used for molecular ecology studies, conservation genetics and in the forensic science, establishing crimes materiality and, consequently, strengthening the juridical proof. |
| Databáze: | OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
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