Robust and scalable barcoding for massively parallel long‑read sequencing

Autor: Ezpeleta, Joaquín, Labari, Ignacio Garcia, Villanova, Gabriela Vanina, Bulacio, Pilar, Lavista Llanos, Sofía, Posner, Victoria María, Krsticevic, Flavia, Arranz, Silvia Eda, Tapia, Elizabeth
Jazyk: angličtina
Rok vydání: 2022
Předmět:
Zdroj: RepHipUNR (UNR)
Universidad Nacional de Rosario
instacron:UNR
Popis: Nucleic-acid barcoding is an enabling technique for many applications, but its use remains limited in emerging long-read sequencing technologies with intrinsically low raw accuracy. Here, we apply so-called NS-watermark barcodes, whose error correction capability was previously validated in silico, in a proof of concept where we synthesize 3840 NS-watermark barcodes and use them to asymmetrically tag and simultaneously sequence amplicons from two evolutionarily distant species (namely Bordetella pertussis and Drosophila mojavensis) on the ONT MinION platform. To our knowledge, this is the largest number of distinct, non-random tags ever sequenced in parallel and the frst report of microarray-based synthesis as a source for large oligonucleotide pools for barcoding. We recovered the identity of more than 86% of the barcodes, with a crosstalk rate of 0.17% (i.e., one misassignment every 584 reads). This falls in the range of the index hopping rate of established, highaccuracy Illumina sequencing, despite the increased number of tags and the relatively low accuracy of both microarray-based synthesis and long-read sequencing. The robustness of NS-watermark barcodes, together with their scalable design and compatibility with low-cost massive synthesis, makes them promising for present and future sequencing applications requiring massive labeling, such as long-read single-cell RNA-Seq. Fil: Ezpeleta, Joaquín. Centro Internacional Franco Argentino de Ciencias de la Información y de Sistemas; Argentina. Fil: Labari, Ignacio Garcia. Centro Internacional Franco Argentino de Ciencias de la Información y de Sistemas; Argentina. Fil: Bulacio, Pilar. Centro Internacional Franco Argentino de Ciencias de la Información y de Sistemas; Argentina. Fil: Tapia, Elizabeth. Centro Internacional Franco Argentino de Ciencias de la Información y de Sistemas; Argentina. Fil: Ezpeleta, Joaquín. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Exactas, Ingeniería y Agrimensura; Argentina. Fil: Bulacio, Pilar. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Exactas, Ingeniería y Agrimensura; Argentina. Fil: Tapia, Elizabeth. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Exactas, Ingeniería y Agrimensura; Argentina. Fil: Villanova, Gabriela Vanina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Fil: Lavista Llanos, Sofía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Fil: Villanova, Gabriela Vanina. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Laboratorio Mixto de Biotecnología Acuática. Centro Científico Tecnológico y Educativo Acuario del Río Paraná; Argentina. Fil: Posner, Victoria María. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Laboratorio Mixto de Biotecnología Acuática. Centro Científico Tecnológico y Educativo Acuario del Río Paraná; Argentina. Fil: Arranz, Silvia Eda. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Laboratorio Mixto de Biotecnología Acuática. Centro Científico Tecnológico y Educativo Acuario del Río Paraná; Argentina. Fil: Krsticevic, Flavia. The Hebrew University of Jerusalem. Robert H Smith Faculty of Agriculture, Food and Environment; Israel.
Databáze: OpenAIRE
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