Análise da atividade antimicrobiana in vitro de anticorpos IgY contra bactérias multirresistentes aos antimicrobianos

Autor: Ana Carolina Navarro dos Santos Ferraro
Přispěvatelé: Emerson José Venâncio ., Floristher Elaine Carrara Marroni, Eiko Nakagawa Itano
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2019
Předmět:
Zdroj: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UEL
Universidade Estadual de Londrina (UEL)
instacron:UEL
Popis: Acinetobacter baumannii e Pseudomonas aeruginosa são responsáveis por infecções hospitalares de difícil tratamento em razão da emergência de cepas multirresistentes aos antimicrobianos. IgY, um anticorpo produzido nas aves, tem sido utilizado em estudos de imunoterapia de doenças por possuir vantagens, como a facilidade na sua produção e purificação. O objetivo desse trabalho foi produzir anticorpos IgY específicos para cepas de A. baumannii e P. aeruginosa multirresistente e determinar sua atividade antimicrobiana in vitro. Galinhas poedeiras (White Leghorns) foram imunizadas via intramuscular nos dias 14, 28, e 42 e receberam 4 doses reforços a cada 42 dias com 2 cepas de P. aeruginosa e uma de A. baumannii produtoras de carbapenemases e portadoras dos genes de resistência aos beta-lactâmicos blaspm-1, blavim-2 e blaoxa-23 respectivamente respectivamente. Foram realizadas coletas de sangue e ovo. As técnicas de ELISA e western blotting foram realizadas para caracterização imunoquímica dos anticorpos IgY. A ação antimicrobiana dos anticorpos IgY foi avaliada por incubação das cepas bacterianas de A. baumannii e P. aeruginosa a 1x106 UFC/mL com anticorpos IgY específicos e inespecíficos na concentração de 5 a 0,156 mg/ml. Os resultados obtidos mostraram que há um aumento nos níveis de anticorpos IgY específicos no soro dos animais a partir da primeira imunização. Os anticorpos IgY extraídos da gema reconhecem os antígenos bacterianos. Além disso, IgY anti-A. baumannii produtora de OXA-23, promoveu a inibição do crescimento in vitro de A. baumannii blaOXA-23 e IgY anti-P. aeruginosa produtora de SPM-1. Enquanto os anticorpos IgY anti-P. aeruginosa produtora de VIM-2 foram capazes de inibir o crescimento in vitro das cepas de P. aeruginosa blaSPM-1 e blaVIM-2, respectivamente. Em ambos os casos a inibição ocorreu de maneira dose dependente. Nossos resultados sugerem que a imunoterapia com IgY possa ser uma alternativa utilizada no tratamento de infecções por A. baumannii e P. aeruginosa multirresistentes aos antimicrobianos. Acinetobacter baumannii and Pseudomonas aeruginosa are responsible for nosocomial infections which are difficult to treat due to the emergence of strains multiresistant to antimicrobials. IgY, an antibody produced in poultry, has been used in studies of the immunotherapy of diseases as it possesses advantages such as the easiness of production and purification. The objective of this work was to produce specific IgY antibodies to the multiresistant A. baumannii and P. aeruginosa strains and determine its antimicrobial activity in vitro. Laying hens (White Leghorns) were immunized intramuscularly on days 14, 28, and 42 and received 4 boosters every 42 days with an inoculum of carbapenemase producing A. baumannii and P. aeruginosa and carriers of genes conferring resistance to ?-lactam bla oxa-23, bla spm-1, and bla vim-2, respectively. Blood and egg samples were taken. ELISA technique and western blotting were performed to immunochemical characterization of IgY antibodies. Bacterial strains of A. baumannii and P. aeruginosa at a concentration of 1x10 6 UFC/mL were incubated with specific and non-specific IgY antibodies in MHB at the concentration of 5 to 0.156 mg/ml. There was an increase in the levels of specific IgY antibodies in the serum of animals since the first immunization. Specific IgY extracted from the yolk showed an intense recognition of bacterial antigens. Added to that, it was observed that IgY anti-OXA-23-producing A. baumannii, IgY anti-SPM-1-producing P. aeruginosa and IgY anti-VIM-2-producing P. aeruginosa promoted inhibition of in vitro growth of A. baumannii and P.aeruginosa carriers of bla OXA-23. bla SPM-1 bla VIM-2, respectively. In both cases, inhibition happened in a dose-dependent way. Our results suggest immunotherapy with IgY to be an alternative to the treatment of infections caused by A. baumannii and P. aeruginosa multiresistant to antimicrobials.
Databáze: OpenAIRE
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