Multiclass determination of antimicrobial residues in chicken muscle using cleaning by SPE and UHPLC-MS/MS

Autor: Floriano, Luana
Přispěvatelé: Prestes, Osmar Damian, Adaime, Martha Bohrer, Oliveira, Lenise Guimarães de, Maldaner, Liane, Vieira, Mariela de Souza, Donato, Filipe Fagan
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2022
Předmět:
Zdroj: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações do UFSM
Universidade Federal de Santa Maria (UFSM)
instacron:UFSM
Popis: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Antimicrobials have been widely used in the prevention and/or treatment of diseases within the broiler supply chain in order to maintain productivity. The indiscriminate use of these veterinary drugs can, however, lead to the presence of residues in the edible tissues of the treated animal, and thus pose risks to the consumer’s health. Therefore, the development of analytical methods that allow the monitoring of these residues is very importance to ensure food safety. In this work, a method was developed and validated for the multiclass determination of 31 antimicrobial residues in chicken muscle by ultra-high performance liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (UHPLC-MS/MS). All sorbents tested during sample preparation were evaluated in terms of efficiency in reducing phospholipids present in the matrix extract. The extraction step was carried out using 2 g of sample, 2 mL of ultrapure water (stirring) and 8 mL of acetonitrile acidified with 1% (m/v) oxalic acid, followed by stirring and centrifugation. Afterwards, a cleaning step was performed using solid-phase extraction (SPE) in the pass-through mode, in which 3 mL of supernatant was eluted directly through the Bond Elut C18 cartridge (500 mg). For substances with a maximum residue limit (MRL) ≥ 100 μg kg-1, the extract was diluted 5 times in ultrapure water. For substances without a defined MRL and for trimethoprim, 1 mL of the extract was evaporated to dryness (N2; 45 ºC) and reconstituted in 1 mL of water:acetonitrile (80:20, v/v). The validation parameters evaluated were selectivity, matrix effect, linearity, trueness (by recovery), precision and decision limit. The procedures were performed using fortified blank matrix analysis to compensate for the matrix effects obtained (between -20% and +152%). All compounds showed linearity in the working ranges evaluated, either from 0 to 2.0 times the MRL for permitted substances or from 0 to 4.0 times the lowest calibrated level (LCL) for unauthorized substances, with coefficients of determination greater than 0.97. The trueness, assessed at levels 0.5; 1.0 and 1.5 times the LMR; and 1.0; 2.0 and 3.0 times the LCL, proved to be adequate, with recoveries between 90 and 117%. The method was applied to 24 chicken muscle samples from different Brazilian states. Only oxytetracycline was detected in one sample, but below the lowest concentration level of the analytical curve (25 μg kg-1). Dentro da cadeia produtiva de frangos de corte, os antimicrobianos têm sido amplamente empregados na prevenção e/ou tratamento de doenças, visando manter a produtividade. Porém, o uso indiscriminado destes medicamentos veterinários pode levar à presença de resíduos nos tecidos comestíveis do animal tratado, e, assim, representar riscos à saúde do consumidor. Diante disso, o desenvolvimento de métodos analíticos que permitam o monitoramento destes resíduos é de grande importância para garantir a segurança dos alimentos. Neste trabalho, desenvolveu-se e validou-se um método para a determinação multiclasse de resíduos de 31 antimicrobianos em músculo de frango por cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas em série (UHPLC-MS/MS, do inglês ultra-high performance liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry). Todos os sorventes testados durante o preparo de amostra foram avaliados em relação à eficiência na redução de fosfolipídios presentes no extrato da matriz. A etapa de extração foi realizada utilizando 2 g de amostra, 2 mL de água ultrapura (agitação) e 8 mL de acetonitrila acidificada com 1% (m/v) de ácido oxálico, seguido de agitação e centrifugação. Após, realizou-se uma etapa de limpeza empregando extração em fase sólida (SPE, do inglês solid-phase extraction) no modo pass-through, em que 3 mL de sobrenadante foram eluídos diretamente através do cartucho Bond Elut C18 (500 mg). No caso das substâncias com limite máximo de resíduo (LMR) ≥ 100 μg kg-1, o extrato foi diluído 5 vezes em água ultrapura. Para as substâncias sem LMR definido e para trimetoprima, 1 mL do extrato foi evaporado até secura (N2; 45 ºC) e reconstituído em 1 mL de água:acetonitrila (80:20, v/v). Os parâmetros de validação avaliados foram seletividade, efeito matriz, linearidade, veracidade (em termos de recuperação), precisão e limite de decisão. Os procedimentos foram realizados por meio da análise de matriz branco fortificada, a fim de compensar os valores de efeito matriz obtidos (entre -20% e +152%). Todos os compostos apresentaram linearidade nas faixas de trabalho avaliadas, seja de 0 a 2,0 vezes o LMR para substâncias permitidas ou de 0 a 4,0 vezes o menor nível de calibração (LCL, do inglês lowest calibration level) para aquelas não autorizadas, com coeficientes de determinação superiores a 0,97. A veracidade, avaliada nos níveis de 0,5; 1,0 e 1,5 vezes o LMR; e 1,0; 2,0 e 3,0 vezes o LCL, mostrou-se adequada, com recuperações entre 90 e 117%. O método validado foi aplicado em 24 amostras de músculo de frango provenientes de diferentes estados do Brasil, sendo detectado resíduo de oxitetraciclina em uma amostra, porém abaixo do menor nível (25 μg kg-1) de concentração da curva analítica para este composto.
Databáze: OpenAIRE
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