Evaluation of synthetic peptides on hepatitis C virus direct inhibition

Autor: Batista, Mariana Nogueira
Přispěvatelé: Universidade Estadual Paulista (Unesp), Rahal, Paula [UNESP], Carneiro, Bruno Moreira, Cilli, Eduardo Maffud [UNESP]
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2018
Předmět:
Zdroj: Repositório Institucional da UNESP
Universidade Estadual Paulista (UNESP)
instacron:UNESP
Popis: Submitted by Mariana Nogueira Batista (batista_m.n@hotmail.com) on 2018-08-11T13:03:25Z No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado_Mariana_final.pdf: 7344224 bytes, checksum: 55aafb62a666837e6ce68354b806d8af (MD5) Rejected by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br), reason: Solicitamos que realize correções na submissão seguindo as orientações abaixo: 01) Como você recebeu financiamento da CAPES, o nome dela deve constar também na FOLHA DE ROSTO e de APROVAÇÃO. Ex.: Financiadoras : FAPESP – Proc: 2016/02174-4 CAPES 02)Na folha de APROVAÇÃO colocar as duas financiadoras e no caso da FAPESP também o número do processo. 03) O resumo e abstract não estão na ordem correta; a ordem correta das páginas pré-textuais: capa, folha de rosto, ficha catalográfica, folha de aprovação, dedicatória, agradecimentos, epígrafe, resumo na língua vernácula, resumo em língua estrangeira e sumário. 04) As páginas 124 e 137 estão em branco, o arquivo não pode conter páginas em branco. 05) No sumário o capítulo I consta na página 20 e no texto ele está na página 21. 06) As REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS que constam na página 49 seriam as referências gerais da tese ou apenas do capítulo I ? 07) A sua tese está dividida em 04(quatro) capítulos; no sumário falta na indicação dos capítulos OBS:-Estou encaminhando via e-mail o template/modelo das páginas pré-textuais para que você possa fazer as correções, sugerimos que siga este modelo pois ele contempla as normas da ABNT Lembramos que o arquivo depositado no repositório deve ser igual ao impresso, o rigor com o padrão da Universidade se deve ao fato de que o seu trabalho passará a ser visível mundialmente. Agradecemos a compreensão. on 2018-08-13T18:52:30Z (GMT) Submitted by Mariana Nogueira Batista (batista_m.n@hotmail.com) on 2018-08-16T19:14:01Z No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado_Mariana_final_Repositório.pdf: 7331796 bytes, checksum: 58221342a38ce66a3aac3483844d50a6 (MD5) Rejected by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br), reason: Solicitamos que realize correções na submissão seguindo as orientações abaixo: No SUMÁRIO Problema 01) Deve ser retirada a citação : Fonte: Adaptada de Wyles et al., 2009 e de Tscherne et al., 2006 ................................ 36 Problema 02) Onde está escrito “Capítulo II - Artigo I ” você deve transcrever na frente também o título do artigo conforme está no texto. E também onde está “Capítulo II - Artigo II “ Lembramos que o arquivo depositado no repositório deve ser igual ao impresso, o rigor com o padrão da Universidade se deve ao fato de que o seu trabalho passará a ser visível mundialmente. Agradecemos a compreensão. on 2018-08-17T12:44:54Z (GMT) Submitted by Mariana Nogueira Batista (batista_m.n@hotmail.com) on 2018-08-27T01:14:39Z No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado_Mariana_final_Repositório.pdf: 7330679 bytes, checksum: 39d49c3a1d3675d0c03801538fc7c12c (MD5) Approved for entry into archive by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br) on 2018-08-27T14:26:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 batista_mn_dr_sjrp_par.pdf: 1033035 bytes, checksum: 69238f6ae4af31310ea7b7df3ec67255 (MD5) Made available in DSpace on 2018-08-27T14:26:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 batista_mn_dr_sjrp_par.pdf: 1033035 bytes, checksum: 69238f6ae4af31310ea7b7df3ec67255 (MD5) Previous issue date: 2018-07-31 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) A hepatite C é a inflamação do fígado decorrente da infecção pelo vírus da hepatite C (HCV), frequentemente evolui para quadros crônicos, sendo considerada mundialmente a maior causa de cirrose e carcinoma hepatocelular. Estima-se que cerca de 71 milhões de pessoas estejam cronicamente infectadas pelo vírus e que dois milhões de novos casos surjam anualmente. A principal via de transmissão do HCV é parenteral e os tratamentos atuais são baseados em antivirais de ação direta (DAAs) de segunda e terceira geração associados ou não ao interferon peguilado e ribavirina. Esses tratamentos apresentam diversos efeitos colaterais, alto custo e mutantes resistentes já foram reportados. Portanto, novos tratamentos efetivos, menos custosos, com maior espectro e com menor nível de efeitos colaterais vêm sendo buscados. Assim, o objetivo do presente trabalho foi desenvolver um pró-fármaco com ação direcionada para células infectadas pelo HCV e eficiente contra mais de uma etapa do ciclo replicativo do vírus. Para tanto, foi realizada uma triagem inicial de seis peptídeos sintéticos avaliados quanto à toxicidade e replicação viral nos replicons subgenômicos do HCV SGR-Feo JFH1 (genótipo 2a) e S52/SG (genótipo 3a) estavelmente expressos na linhagem celular de hepatoma humano Huh-7.5. O peptídeo mais eficiente, GA-Hecate foi avaliado nos replicons completos do HCV, J6/JFH-1 RLUC e JFH-1, para todas as etapas do ciclo infeccioso do vírus, e posteriormente modelado para produção de um pró-fármaco baseado no sítio de clivagem da protease NS3/4A do HCV VVCCDD. O peptídeo GA-Hecate apresentou em sua máxima concentração segura, eficiência de inibição de 85%, 95%, 50% e 99% para replicação, entrada, liberação e infectividade respectivamente. Seu mecanismo de ação foi associado a alterações na fluidez da membrana celular, redistribuição e redução de droplets de lipídeo, bem como intercalação em dsRNA. O desenvolvimento do Pró-fármaco preveniu a toxicidade em células não infectadas pelo HCV e induziu a inibição do vírus, mas não foi absolutamente inativo na presença de partículas virais livres e eritrócitos. O estudo proposto prova o conceito do uso de sítio de clivagem da protease NS3 do HCV como direcionador de fármacos. Entretanto mais estudos ainda são necessários para atingir um pró-fármaco completamente inerte em células não infectadas. Hepatitis C is the liver inflammation arising from Hepatitis C virus (HCV) infection, frequently it evolves to chronic conditions, and has been considered the major world cause of cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Is estimated that around 71 million people are chronically infected by this virus and 2 million of new cases arise by year. The main pathway of transmission is parenteral and current treatments are based on second and third generation of direct-acting antivirals (DAAs), associated or not to pegylated interferon and ribavirin. These treatments present many side-effects, high cost and resistant mutants have been reported. Therefore, new effective treatments with low costs, major spectrum and less side effects have been sought. Thus, the aim of this study was to develop a prodrug with direct action to HCV-infected cells and efficient for more than one step of virus replication cycle. For this, an initial screening was performed testing six synthetic peptides concerning its toxicity and its effect on HCV subgenomic replicons SGR-Feo JFH1 (genotype 2) and S52/SG (genotype 3) replication, stably expressed in the hepatoma cell line Huh-7.5. The most efficient peptide, GA-Hecate was assessed in the HCV complete replicons J6/JFH-1 RLUC and JFH-1 for all steps of viral infectious cycle and then modeled to produce a prodrug based on HCV protease NS3/4A cleavage site VVCCDD. Peptide GA-Hecate presented at its maximum safe concentration, inhibition of 85%, 95%, 50% and 99% for replication, entry, release and infectivity respectively. Its mechanism of action was associated with alteration in membrane fluidity, redistribution and reduction of lipid droplets quantity, as well as, dsRNA intercalation. The prodrug development prevented the toxicity in non-HCV-infected cells and induced the virus inhibition, but was not absolutely inactive in the presence of free virus particles and erythrocytes. The proposed study proves the concept that the use of NS3 protease cleavage site as a drug carrier. However, more studies are still needed for reaching a prodrug completely inert in non-infected cells. FAPESP: 2016/02174-4
Databáze: OpenAIRE
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