Optimización de un protocolo de PCR convencional para detectar los viroides Avocado sunblotch viroid (ASBVd) Y Potato spindle tuber viroid (PSTVd) de Persea americana Mill
| Autor: | María Valderrama Valencia, Miguel Angel Nieto-Taype, Berly Cárdenas Pillco |
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| Jazyk: | Spanish; Castilian |
| Rok vydání: | 2017 |
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| Zdroj: | Veritas; Vol. 15 Núm. 1 (2014): VÉRITAS: Investigación, Innovación y Desarrollo; 45-50 Revistas-Universidad Católica de Santa María Universidad Católica de Santa María instacron:UCSM |
| ISSN: | 1684-7822 |
| Popis: | The avocado (Persea americana Mill) is a plant food interest, the problem at the level of the crop are diseases that reduce both plant and post-harvest quality; among them are produced by the viroids, including Avocado you have to sunblotch viroid (ASBVd) and Potato spindle tuber viroid (PSTVd) who dramatically reduce the organoleptic properties of the fruit. During the production process of said culture is needed pathogen free seedlings necessitating early detection. Currently there are methods of detecting an estimated cost of 24 USD through the use of real-time PCR technique.In the search for methods cheaper and reliable detection it was carried out standardization of a conventional PCR protocol that allows reducing the cost of detecting viroid in avocado mother plants. To this was done using the technique of reverse transcriptase reverse coupled the polymerase chain reaction (RT-PCR) end time using the kit One-Step RT-PCR (Novagen) and Two-step (Promega), the the second gave the best result. Finally it was possible to amplify the bands that identify viroids using the PCR technique final time, thus reducing the cost of detection of approximately USD 12 per sample. El palto (Persea americana Mill) es una planta de interés alimenticio, cuyo problema a nivel del cultivo son las enfermedades que reducen tanto la calidad fitosanitaria y post-cosecha; de entre ellos tenemos a los producidas por los viroides, entre ellos se tiene al Avocado sunblotch viroid (ASBVd) y el Potato spindle tuber viroid (PSTVd) quienes disminuyen dramáticamente las propiedades organolépticas del fruto. Durante el proceso de producción de dicho cultivo es necesario contar con plantones libres de patógenos lo que hace necesario su temprana detección. En la actualidad existen métodos de detección cuyo costo aproximado es de 24 USD a través del uso de la técnica de PCR tiempo real.En la búsqueda de métodos de detección más baratos y confiables se llevó a cabo la estandarización de un protocolo de PCR convencional que permita disminuir el costo de detección de viroides en plantas madre de palto. Para ello se hizo uso de la técnica de Retrotranscriptasa reversa acoplada la reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR) tiempo final haciendo uso de los kit One-Step RT-PCR (Novagen) y Two-step (Promega), siendo el segundo el ofreció el mejor resultado. Finalmente se logró amplificar las bandas que identifican a los viroides empleando la técnica de PCR tiempo final, reduciendo así el costo de detección a un aproximado de 12 USD por muestra. |
| Databáze: | OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
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