Analysis of the gene expression from the TLR2, TLR4 and TLR9 receptor and the pro and anti-inflammatory cytokine’s production in patients with reactivated and cicatricial ocular toxoplasmosis

Autor: Teodoro, Leonardo de Freitas
Přispěvatelé: Universidade Estadual Paulista (Unesp), Jorge, Eliane Chaves [UNESP]
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2020
Předmět:
Zdroj: Repositório Institucional da UNESP
Universidade Estadual Paulista (UNESP)
instacron:UNESP
Popis: Submitted by Leonardo de Freitas Teodoro (leo.teodoro@gmail.com) on 2020-11-29T20:06:21Z No. of bitstreams: 1 Defesa de mestrado - Leonardo final corrigida final.pdf: 1988699 bytes, checksum: 0c3aad7b5320a2b0c1d28cfa6fcffa9a (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: Problema 1: capa Todas as informações colocadas na capa das dissertações devem estar na cor verde. Sugiro que verifique o modelo de capas de dissertação (item 12.1) disponível na página da pós-graduação – serviços – formulários. Link: https://www.fmb.unesp.br/#!/ensino/pos-graduacao/mestrado-academico-e-doutorado/servicos/formularios/. Assim que tiver efetuado a correção submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-12-01T13:47:16Z (GMT) Submitted by Leonardo de Freitas Teodoro (leo.teodoro@gmail.com) on 2020-12-01T17:57:35Z No. of bitstreams: 1 Defesa de mestrado - Repositorio.pdf: 1994965 bytes, checksum: d359b604d4e8cba1e65fe740aba001c7 (MD5) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-12-03T18:37:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 teodoro_lf_me_bot.pdf: 1994965 bytes, checksum: d359b604d4e8cba1e65fe740aba001c7 (MD5) Made available in DSpace on 2020-12-03T18:37:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 teodoro_lf_me_bot.pdf: 1994965 bytes, checksum: d359b604d4e8cba1e65fe740aba001c7 (MD5) Previous issue date: 2020-02-20 Introdução: A toxoplasmose é uma zoonose causada pelo protozoário Toxoplasma gondii, parasita intracelular obrigatório que atinge o olho por via hematogênica, na forma de taquizoítos livres ou dentro de macrófagos circulantes. No olho, a reação imune celular e humoral induzida pelo toxoplasma leva à uveíte posterior e retinocoroidite focal necrosante. Cerca de dois terços dos indivíduos acometidos podem apresentar recidiva nas margens da lesão primária, em outro local da retina ou no olho contralateral. As causas das recidivas ainda são pouco conhecidas, porém a resposta imune desempenha um papel essencial. O mapeamento de mediadores inflamatórios na TO tem ganho importância por facilitar a compreensão sobre a modulação da inflamação, que varia com a expressão das citocinas. Estudo recente mostrou que há diferenças no perfil de expressão destes mediadores no humor aquoso, durante as recidivas de TO. Outras evidências sugerem que os TLRs (toll-like receptors) estariam envolvidos na reação imune contra o toxoplasma, e que várias proteínas PAMPs (padrões moleculares associados ao patógeno) foram associadas à ativação destes receptores. No entanto, não há estudos sobre o papel dos TLRs na patogênese da TO e o envolvimento deles nos mecanismos envolvidos nas recidivas. Objetivo: avaliar o padrão de resposta imunológica sistêmica de pacientes com toxoplasmose recidivada e cicatricial por meio da expressão gênica dos receptores TRLs e de citocinas pró e anti-inflamatórias. Métodos: Foram avaliados 44 indivíduos, divididos em três grupos: 14 com TO reativada (TOR); 16 com TO cicatricial (TOC); e 14 sem toxoplasmose ocular (grupo controle – C). Os pacientes dos grupos TOR e TOC foram submetidos a avaliação oftalmológica completa. A quantificação da expressão gênica dos TLR2, TLR4 e TLR9 por q-PCR foi realizada a partir de células mononucleares do sangue periférico dos participantes do estudo. A produção de citocinas IL-6, IL-10 e TNF-α no soro foi quantificada por ELISA. Resultados: As idades variaram de 19 a 68 anos no grupo TOC, e 20 a 49 anos no grupo TOR. No grupo de TOC, 8 (57,1%) eram do sexo feminino e no grupo TOR 11 eram homens (68,7%). Quanto aos TLRs, a expressão do TLR2 foi diminuída nos grupos TOC e TOR em relação aos controles. O grupo TOR apresentou expressão diminuída do TLR4 em relação aos grupos TOC e controle enquanto a expressão de TLR9 foi aumentada no grupo TOR em relação ao grupo TOC. Já na avaliação das citocinas, a IL-10 apresentou diminuição no grupo TOR em relação ao controle. As demais citocinas não apresentaram alteração entre os grupos. Conclusão: Os achados sugerem que durante as recidivas da toxoplasmose ocular há envolvimento do TLR9 e manutenção do estado pró-inflamatório, evidenciado pela diminuição da citocina anti-inflamatória IL-10. Introduction: Toxoplasmosis is a zoonosis caused by the protozoan Toxoplasma gondii, an obligate intracellular parasite that reaches the eye via the hematogenous pathway, in the form of free tachyzoites or within circulating macrophages. In the eye, the cellular and humoral immune reaction caused by toxoplasma lead to posterior uveitis and necrotizing focal retinochoroiditis. About two-thirds of ocular toxoplasmosis (OT) patients may relapse on the margins of the primary lesion, elsewhere on the retina or even on the contralateral eye. The causes of relapses are still poorly understood, but the immune response plays an essential role. The mapping of inflammatory mediators in OT has gained importance for facilitating the understanding of the modulation of inflammation, which varies with the expression of cytokines. A recent study showed that there are differences in the expression profile of these mediators in aqueous humor during recurrences of OT. Other evidence suggests that TLRs (toll-like receptors) play a role in the immune reaction against toxoplasma, and several PAMP (pathogen-associated molecular patterns) proteins have been associated with the activation of these receptors. However, no studies are correlating TLRs in the pathogenesis of ocular toxoplasmosis and the mechanisms involved in recurrences. Objective: To evaluate the pattern of the systemic immune response in patients with recurrence and cicatricial toxoplasmosis through gene expression of TRL receptors and pro and anti-inflammatory cytokines. Methods: Forty-four individuals were evaluated, divided into three groups: 14 with recurrent ocular toxoplasmosis (ROT); 16 with cicatricial ocular toxoplasmosis (COT); and 14 without ocular toxoplasmosis (control group - C). The patients in the ROT and COT groups underwent a complete eye evaluation. The quantification of gene expression of TLR2, TLR4 and TLR9 by q-PCR was performed from mononuclear cells in the peripheral blood of the study participants. The production of cytokines IL-6, IL-10 and TNF-α in serum was quantified by ELISA. Results: Ages ranged from 19 to 68 years in the COT group, and 20 to 49 years in the ROT group. In the COT group, 8 (57.1%) were female and in the ROT group, 11 were men (68.7%). As for the TLR, the expression of TLR2 was decreased in the COT and ROT groups in relation to the controls. The ROT group showed decreased expression of TLR4 in relation to the COT and control groups while the expression of TLR9 was increased in the ROT group in relation to the COT group. In the evaluation of cytokines, IL-10 showed a decrease in the ROT group compared to the control. The other cytokines did not change between groups. Conclusion: The findings suggest that during the recurrence of ocular toxoplasmosis there is involvement of TLR9 and maintenance of the pro-inflammatory state, evidenced by the decrease in the anti-inflammatory cytokine IL-10.
Databáze: OpenAIRE
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