Expressão de IL-15 durante a infecção por Trypanosoma cruzi

Autor: Rafael André Ferreira
Přispěvatelé: Santuza Maria Ribeiro Teixeira, Fabiana Simão Machado, Helton da Costa Santiago, Diana Bahia
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2018
Předmět:
Zdroj: Repositório Institucional da UFMG
Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)
instacron:UFMG
Popis: CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Ensaios de duplo híbrido de levedura forneceram evidências de que a interleucina 15 (IL-15), seria uma das proteínas da célula hospedeira com que as amastinas, proteínas presentes na superfície de Trypanosoma cruzi e Leishmania spp, poderiam interagir durante o seu desenvolvimento intracelular. Com o objetivo de validar os resultados do duplo híbrido e investigar o papel da IL-15 durante a infecção por T. cruzi, nós analisamos macrófagos peritoneais murinos infectados com T. cruzi e L. amazonensis, bem como células L6, LLCMK2 e H9C2 infectadas com T. cruzi, por meio de Elisa e ensaios de imunofluorescência. Utilizando a técnica de ELISA de captura, mostramos a indução da produção da proteína na sua isoforma citoplasmática nas células infectadas comparadas às células não infectadas. Por outro lado, os níveis da forma secretada foram indetectáveis em todos os ensaios de infecção, com exceção da infecção das células H9C2. Em macrófagos murinos infectados por L. amazonensis, IL-15 teve sua expressão diminuída nas horas iniciais da infecção, porém após 72 horas foi observado que os níveis de IL-15 intracelular chegavam a níveis próximos daqueles encontrados em macrófagos não infectados. Análises de imunofluorescência mostraram uma distribuição uniforme de IL-15 no citoplasma e no núcleo das células não-infectadas, ao contrário das células infectadas, nas quais foi observado um aumento da concentração de IL-15 no citoplasma. Não somente em macrófagos infectados por T. cruzi ou L. amazonensis, mas também em células L6 infectados com T. cruzi, foi observada uma polarização de IL-15 em regiões próximas aos amastigotas. Macrófagos murinos previamente estimulados com IL-15 recombinante tiveram sua ação tripanocida potencializada, sugerindo que IL-15 secretada e intracelular possuem diferentes papéis durante a infecção por T. cruzi. Macrófagos de camundongos nocautes para IL-15 infectados com T. cruzi apresentaram redução do número de amastigotas por célula infectada e redução na porcentagem de células infectadas quando comparados com os macrófagos de camundongos selvagens, corroborando ainda mais a hipótese do papel da IL-15 citoplasmática na viabilidade do estágio intracelular do parasito. Yeast two-hybrid assays provide evidences indicating that interleukin 15 (IL-15) are among the host cell proteins with which Trypanosoma cruzi amastins interact during the parasite intracellular development. A role of IL-15 during T. cruzi and Leishmania spp infection have been also suggested from transcriptome analyses of human fibroblasts and mice macrophages infected with T. cruzi and L. major, respectively, which showed a significant increase in the IL-15 mRNA expression compared to uninfected cells. With the aim to validate the yeast two-hybrid (Y2H) result and to investigate the role of IL-15 during T. cruzi infection, we analysed murine peritoneal macrophages infected with T. cruzi and L. amazonensis as well as L6 myoblasts, LLCMK2 cells and H9C2 cells infected with T. cruzi, using ELISA and immunofluorescence assays. ELISA performed with proteins extracts showed increased levels of intacellular IL-15 in infected cells compared to uninfected fibrobalst and macrophages. With the exception of the infection of H9C2 cells, the secreted form of IL-15 was undetectable. In murine macrophages infected by L. amazonensis, IL-15 showed decreased expression in the early hours of the infection. Imunofluorescence analyses showed an uniformed distribution of IL-15 in the cytoplasm and nuclei of uninfected macrophages whereas, in infected cells, IL-15 is predominantly localized in the cytoplasm. Importantly, not only in infected macrophages but also in L6 cells infected with T. cruzi, an interaction of IL-15 with the membrane of amastigotes was observed. A similar polarization of IL-15 next to parasitophorus vacuoles containing amastigotes was observed in macrophages infected with L. amazonensis. Murine macrophages previously stimulated with IL-15 recombinant have enhanced killing capacity of T. cruzi amastigotes, indicating that the roles of secreted IL-15 and the intracellular form of this cytokine may differ during the T. cruzi infection. When macrophages of mice IL-15-/- were infected by T. cruzi, a reduction in the number of amastigote per infected cells and reduction in the percentage of infected cells was observed when compared to the wild type macrophages, further suggetsing a role of the cytoplasmic IL-15 in the viability of the intracellular stage of the parasite.
Databáze: OpenAIRE
Externí odkaz: