Caracterização e expressão heteróloga de proteínas de Corynebacterium pseudotuberculosis para a otimização de um teste intradérmico de hipersensibilidade para o diagnóstico da Linfadenite Caseosa
| Autor: | Renata de Faria Silva |
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| Přispěvatelé: | Núbia Seyffert, Vasco Ariston de Carvalho Azevedo, Ronaldo Alves Pinto Nagem, Luiz G. Bermudez-humaran |
| Jazyk: | portugalština |
| Rok vydání: | 2012 |
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| Zdroj: | Repositório Institucional da UFMG Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG) instacron:UFMG |
| Popis: | Corynebacterium pseudotuberculosis é uma bactéria Gram-positiva que causa a Linfadenite Caseosa (LC), uma doença infecto-contagiosa crônica que acomete pequenos ruminantes, promovendo a redução da produtividade dos animais infectados. A doença se caracteriza pela formação de abscessos em nódulos linfáticos superficiais e/ou órgãos internos. Vários métodos para o diagnóstico da LC subclínica foram desenvolvidos, porém não alcançaram eficácia e praticidade satisfatórias. Assim, nesse trabalho selecionamos seis alvos protéicos dos 104 previamente descritos, caracterizamos os produtos gênicos das Open Reading Frame(ORFs) e produzimos as proteínas recombinantes para a otimização de um Teste Intradérmico de Hipersensibilidade (TIH) paraa LC. Os insertos das seis ORFs foram amplificados após a extração do DNA genômico da linhagem 1002 de C. pseudotuberculosiscom a utilização de iniciadores específicos, que ligados aos vetores pAE e pET-28a foram transformados em Escherichia coliDH5para a clonagem molecular. Para verificar a expressão das proteínas recombinantes, os clones foram transformados em E. coli C43 pLysSe a cinética de expressão realizada. Duas proteínasrecombinantes foram produzidas e submetidas a Western blotcom soros de caprinos infectados com C. pseudotuberculosis, demonstrando antigenicidade nesses testes preliminares. Novos testes de caracterização das proteínas recombinantes serão realizados e esperamos que as mesmas possam ser utilizadas na otimização de um TIH de elevada acurácia, para o controle da LC nos rebanhos de ovinos e caprinos. Corynebacterium pseudotuberculosisis a Gram-positive bacterium that causes caseous lymphadenitis (CLA), a chronic infectious disease that affects small ruminants, promoting the reduction of productivity of infected animals. The disease is characterized by the formation of abscesses in the lymph nodes surface and/or internal organs. Several methods for the diagnosis of subclinical CLA been developed, but have not reached satisfactory efficacy and practicability. Thus, this study selected six of the 104 proteins targets previously described, we characterize the genics products of the Open Reading Frame(ORF) and produce recombinant proteins for the optimization of an Intradermal Hypersensitivity Test (IHT) to LC. The inserts of the six ORFs were amplified after extraction of genomic DNA from strain 1002 of C. pseudotuberculosiswith the use of specific primers which bound to vectors pAE and pET-28a were transformed into Escherichia coliDH5for molecular cloning. To verify the expression of recombinant proteins, clones weretransformed into E. coliC43 pLysS and expression kinetics performed. Two recombinant proteins were produced and subjected to Western blotwith sera from goats infected with C. pseudotuberculosis, demonstrating antigenicity in these preliminary tests. New tests for characterization of recombinant proteins will be made and hopefully they can be used in the optimization of an IHT high accuracy for control of CLA in flocks of sheep and goats. |
| Databáze: | OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
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