Synthesis, characterization and evaluation of the in vitro and in vivo antimelanoma activity of the synthetic 1,3-diphenyl-2-benzyl-1,3-propanedione derivative
| Autor: | Nascimento, Fernanda Rodrigues |
|---|---|
| Přispěvatelé: | Muñoz, Gaspar Diaz, Santos, Anésia Aparecida dos, Rocha, Márcio dos Santos, Matta, Sérgio Luis Pinto da, Dias, Marisa Alves Nogueira |
| Rok vydání: | 2018 |
| Předmět: | |
| Zdroj: | LOCUS Repositório Institucional da UFV Universidade Federal de Viçosa (UFV) instacron:UFV |
| Popis: | 1) Sigilo expirado em 28/11/2021, conforme termo de publicação. 2) Texto em português e inglês. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) O Câncer de pele apresenta-se em dois tipos: O não-melanoma e o melanoma. O primeiro apresenta baixa letalidade e alto índice de cura devido a detecção precoce. Já o segundo tipo, melanoma, apresenta alta mortalidade devido a sua facilidade de metástase. O tratamento do melanoma no Brasil pelo Sistema único de Saúde (SUS) possui como medicamento de escolha a Dacarbazina. É um fármaco pouco específico, podendo atuar em qualquer etapa do ciclo celular e apresenta resposta em apenas 20% dos casos por apenas 5 meses. Além disso a resposta terapêutica completa ocorre apenas em 5% dos casos. Os demais fármacos mais modernos e específicos existentes no mercado são muito caros para serem incorporados pelo SUS e o ganho de sobrevida do paciente não é tão significativo. A busca por novas drogas que sejam mais eficazes e com custo baixo se faz necessário. O dibenzoilmetano (DBM) (1,3- Difenilpropano-1,3-propanodiona) e seus derivados são substâncias que apresentam propriedades antineoplásicas promissoras. O derivado 1,3-Difenil- 2-benzil-1,3-propanodiona (DPBP) foi sintetizado, purificado por HPLC e caracterizado por RMN H 1 e RMN C 13 . Os estudos in vitro foram realizados em células das linhagens cancerígena B16F10 e normal melan-A. O IC 50 do DPBP para B16F10 encontrado foi de 1,97 M e o índice de seletividade (IS) encontrado foi de 41,94. O tipo de morte celular foi determinado por citometria de fluxo. O tratamento em células B16F10 por 16 horas com o composto DPBP na concentração 63,62 M induziu a morte celular predominante por apoptose em 84,5% do total de células. A forma como o DPBP desencadeia a apoptose foi avaliada por RTq-PCR e revelou uma inibição de gene P21 e um estímulo dos genes CDK- 1, Aparf-1, Bax, Fas L, TNF- e SIRT-1, indicando que as vias intrínsecas e extrínsecas são acionadas pelo composto. Além disso um experimento em pinça optica foi realizado para avaliar a interação do composto com o DNA. Verificou-se que o composto DPBP interage com DNA podendo levar dano ao mesmo e contribuindo para o acionamento da apoptose intrínseca. Os experimentos in vivo foram realizados em camundongos C57BL para avaliar a eficácia do DPBP em tumores induzidos. Foram utilizados dois veículos de uso tópico, pomada (P) e gel transdérmico (GT) contendo as seguintes concentrações de DPBP: 0,5 mg/g; 1,0 mg/g e 2,0 mg/g. As concentrações 1,0 mg/g e 2,0 mg/g apresentaram maior potencial em reduzir o volume tumoral. O GT nas concentrações de 0,5 e 1,0 mg/g apresentaram melhores resultados na redução do VEGF em relação ao veículo pomada. Dos órgãos submetidos a análise histológica somente dos linfonodos sentinela (LS) apresentaram alteração com invasão da cápsula no controle com tumor não tratado. O veículo pomada apresentou capacidade em reduzir a invasão da cápsula do linfonodo, portanto reduzindo a metástase. Os parâmetros bioquímicos analisados no sangue dos animais não apresentaram alterações, exceto as dosagens de acido úrico que apresentaram redução em todos os tratamentos. O composto estudado DPBP apresentou-se promissor como droga para combater o melanoma de forma eficiente, pois possui um mecanismo multifatorial que envolve alta seletividade por células de melanoma; indicativo de redução da angiogênese, além disso não apresenta toxicidade hepática e renal. Skin cancer has two types: non-melanoma and melanoma. The first one presents low lethality and high cure rates due to early detection. The second type, melanoma, presents high mortality due to its ease of metastasis. The treatment of melanoma in Brazil by the Public Health System has as its drug of choice Dacarbazine. It is a low effective drug, able to act at any stage of the cell cycle and responds in only 20% of cases for only 5 months. In addition, the complete therapeutic response occurs in only 5% of cases. The other more modern and specific drugs available in the market are very expensive to be incorporated by the Public Health System and the survival changes of the patient is not so significant. The search for a new drug that are more effective and with low cost becomes it’s necessary. Dibenzoylmethane (DBM) (1,3- Diphenylpropane-1,3-propanedione) and its derivatives are substances with promising antineoplastic properties. The 1,3-Diphenyl-2-benzyl-1,3- propanedione derivative (DPBP) was synthesised, purified by HPLC and characterised by 1 H NMR and 13 C NMR. In vitro studies were performed on cells of the carcinogenic B16F10 and normal melan-A lines. The IC 50 of the DPBP for B16F10 found was 1.97 μM and the selectivity index (IS) found was 41.94. The type of cell death was determined by flow cytometry. Treatment in B16F10 cells for 16 hours with compound DPBP at 63.62 μM concentration induced predominant cell death by apoptosis in 84.5% of the total cells. The way DPBP triggered apoptosis was assessed by RTq-PCR and revealed a P21 gene inhibition and a stimulation of the CDK-1, Aparf-1, Bax, Fas L, TNF- and SIRT- 1 genes, indicating that the Intrinsic and extrinsic pathways are driven by the compound. In addition, an experiment in optic nippers was performed to evaluate the interaction of the compound with DNA. It has been found that the DPBP compound interacts with DNA and can lead to damage and contribute to the activation of intrinsic apoptosis. In vivo experiments were performed on C57BL mice to evaluate the efficacy of DPBP in induced tumours. Two topical, ointment (P) and transdermal gel (GT) vehicles containing the following concentrations of DPBP were used: 0.5 mg / g; 1.0 mg / g and 2.0 mg / g. Concentrations 1.0 mg / g and 2.0 mg / g showed greater potential in reducing tumours size. The TG at concentrations of 0.5 and 1.0 mg / g showed better results in the reduction of VEGF relative to the ointment vehicle. From the organs submitted to histological analysis only the sentinel lymph nodes (LS) presented alteration with invasion of the capsule in compararison with untreated tumor. The ointment was able to reduce invasion of the lymph node capsule, thereby reducing metastasis. The biochemical parameters analysed in the animals' blood did not present alterations, except for the uric acid dosages that showed reduction in all the treatments. The studied compound DPBP was promising as a drug to combat melanoma efficiently, as it has a multi factor mechanism that involves high selectivity by melanoma cells; indicative of reduction of angiogenesis, in addition it does not present hepatic and renal toxicity. |
| Databáze: | OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
|