Estandarización de la técnica de ELISA para el diagnóstico de Toxocariasis humana

Autor: Espinoza, Yrma, Huapaya, Pedro, Suárez, Roxana, Chávez, Victoria, Sevilla, Carlos, Dávila, Elizabeth, Huiza, Alina, Naquira, César, Alva, Pilar
Jazyk: Spanish; Castilian
Rok vydání: 2003
Předmět:
Zdroj: Anales de la Facultad de Medicina; Vol. 64 No. 1 (2003); 7-12
Anales de la Facultad de Medicina; Vol. 64 Núm. 1 (2003); 7-12
Revistas Universidad Nacional Mayor de San Marcos
Universidad Nacional Mayor de San Marcos
instacron:UNMSM
ISSN: 1609-9419
1025-5583
Popis: Objetive: To standardise ELISA technique for Toxocara canis human infection diagnosis by using excreted-secreted antigen prepared in our country. Material and methods: T. canis eggs were collected by incubation with formalin (2%) at 28oC in order to obtain third stage larvae that were freed and incubated in RPMI at 37°C for 7 days; the medium was replaced by a similar one and stored at - 20°C. Antigen was concentrated and protein dosage was made. Sera from patients with toxocariasis and newborns were used as positive and negative controls by ELISA technique, dilutions ¼ to 1/1024. Polystyrene plates were sensitised with antigen in several concentrations and conjugated peroxidase with horseradish IgG, anti human IgG and substrate OPD were used. Absorbance was read with spectrophotometer (Multiskan plus labsystems) at 492 nm. Cut off point was determined by negative sera absorbencies arithmetic mean plus 3 standard deviations. Results: Antigen concentration was 50 ug/mL, sera dilution 1/128, conjugate dilution 1/1000 with optical density above 0,241. Cconclusions: ELISA technique for serologic diagnosis of human infection by Toxocara canis could be used in epidemiological studies in our country. Its efficacy will be determined in future studies. Objetivo: Estandarizar la técnica ELISA para el diagnóstico de infección humana por Toxocara canis con antígeno excretado-secretado preparado en nuestro medio. Material y métodos: Se colectó huevos de T. canis y se les incubó con formol (2%) a 28oC hasta obtener larvas de tercer estadio, las que luego de ser liberadas fueron incubadas en RPMI a 37°C por 7 días; se reemplazó el medio por otro similar y almacenó a -20°C. Se concentró el antígeno y se dosó proteínas. Para la técnica de ELISA se utilizó sueros de pacientes con toxocariasis y de niños recién nacidos, como controles positivos y negativos, respectivamente, diluidos desde ¼ hasta 1/1024. Se sensibilizó placas de poliestireno con varias concentraciones de antígeno, utilizándose conjugado de peroxidasa e IgG de carnero anti IgG humana y sustrato OPD. Se realizó lectura de absorbancia a 492 nm con espectrofotómetro (Multiskan plus labsystems), siendo el punto de corte el promedio aritmético de la absorbancia de los sueros negativos más 3 desviaciones estándar. Resultados: La concentración óptima del antígeno fue 50 ug/mL, la dilución del suero 1/128, la dilución del conjugado 1/1000 con densidad óptica mayor a 0,241. Conclusiones: La técnica de ELISA para diagnóstico serológico de infección humana por Toxocara canis podría ser utilizada en estudios epidemiológicos en nuestro país. Queda pendiente la evaluación de su eficacia en futuros estudios.
Databáze: OpenAIRE
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