Production of SARS-CoV-2 pseudotyped viral particles for the evaluation of new therapies against COVID-19

Autor: ETCHEVERS, Lucas, SILVESTRINI, Paula, VELAZQUEZ, Natalia, BARAVALLE, María Eugenia, RENNA, María Sol, OLMOS, Florencia Martín, ORTEGA, Hugo H., MARELLI, Belkis
Jazyk: Spanish; Castilian
Rok vydání: 2022
Zdroj: FAVE Sección Ciencias Veterinarias; Vol. 20 Núm. Suppl. (2021): FAVE Sección Ciencias Veterinarias-Suplemento; 44-50
FAVE Sección Ciencias Veterinarias; Vol 20 No Suppl. (2021): FAVE Sección Ciencias Veterinarias-Supplement; 44-50
FAVE Sección Ciencias Veterinarias; v. 20 n. Suppl. (2021): FAVE Sección Ciencias Veterinarias-Suplemento; 44-50
Biblioteca Virtual (UNL)
Universidad Nacional del Litoral
instacron:UNL
ISSN: 2362-5589
1666-938X
DOI: 10.14409/favecv.v20iSuppl.
Popis: A imunoterapia passiva como tratamento contra o vírus SARS-CoV-2 (síndrome respiratória aguda grave coronavírus-2) requer a quantificação da capacidade neutralizante dos anticorpos para o desenvolvimento de terapias eficazes. Para isso, é necessário o uso de partículas virais pseudotipadas não replicativas. No entanto, os reagentes de transfecção necessários para sua produção são caros e, consequentemente, é uma limitação na hora de escalonar a produção. Uma forma de contornar essa limitação é o uso da polietilenoimina (PEI), um polímero catiônico de baixo custo. O objetivo do trabalho foi otimizar um ensaio de transfecção transitória de baixo custo para produzir pseudopartículas virais que expressam a proteína Spike do vírus SARS-CoV-2. Os ensaios de transfecção foram realizados em células HEK-293T avaliando diferentes concentrações de PEI e tempos de incubação. A transfecção foi avaliada por microscopia de epifluorescência e citometria de fluxo, mostrando que a condição de transfecção que tendeu a produzir os melhores resultados foi após 48 horas de incubação usando uma razão 1/10 (pDNA/PEI). Em conclusão, foi possível adaptar um protocolo para produzir partículas lentivirais que expressam Spike usando um reagente de transfecção de baixo custo. Isso permitiria que a produção fosse ampliada para posteriormente projetar uma plataforma para avaliar terapias para o COVID-19. Passive immunotherapy as a treatment against SARS-CoV-2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus-2) requires to quantify neutralizing capacity of antibodies for development of effective therapies. However, the transfection reagents necessary for its production are expensive and, consequently, it is a limitation for the scaling up production. Using of polyethyleneimine (PEI), a low-cost cationic polymer, allows to avoid this. The objective of this work was to optimize a low-cost transient transfection assay to produce pseudoparticles that express the Spike protein of SARS-CoV-2. Transfection assays were performed in HEK-293T cells treated with different PEI concentrations and evaluating different incubation times. Transfection was assesed by epifluorescence microscopy and flow cytometry, showing that the transfection condition that tends to yield better results was after 48 hours of incubation using a 1/10 ratio (pDNA / PEI). In conclusion, it has been possible to adapt a protocol to produce spike-expressing lentiviral particles using a low-cost transfection reagent. This would allow to scale up the production and, following, to design a platform for evaluation of COVID-19 therapies. La inmunoterapia pasiva como tratamiento contra el virus SARS-CoV-2 (del inglés, severe acute respiratory syndrome coronavirus-2) requiere de la cuantificación de la capacidad neutralizante de los anticuerpos para el desarrollo de terapias efectivas. Para ello, es necesario el uso de partículas virales pseudotipadas no replicativas. Sin embargo, los reactivos de transfección necesarios para su producción son costosos y, en consecuencia, resulta una limitante al momento de escalar la producción. Una manera de eludir esta limitante es el uso de la polietilenimina (PEI), un polímero catiónico de bajo costo. El objetivo del trabajo consistió en optimizar un ensayo de transfección transitoria de bajo costo para producir pseudopartículas virales que expresen la proteína Spike del virus SARS-CoV-2. Se realizaron ensayos de transfección en células HEK-293T evaluando diferentes concentraciones de PEI y tiempos de incubación. La transfección se evaluó mediante microscopía de epifluorescencia y citometría de flujo, mostrando que la condición de transfección que tiende a arrojar mejores resultados fue luego de 48 horas de incubación utilizando una relación 1/10 (ADNp/PEI). En conclusión, se ha logrado adaptar un protocolo para producir partículas lentivirales que expresan Spike utilizando un reactivo de transfección de bajo costo. Esto permitiría escalar la producción para, posteriormente, diseñar una plataforma para evaluar terapias para COVID-19.
Databáze: OpenAIRE
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