Evaluation of mesenchymal stem cells derived from equine synovial membrane in alginate hydrogel microcapsules
| Autor: | Santos, Vitor Hugo dos [UNESP] |
|---|---|
| Přispěvatelé: | Universidade Estadual Paulista (Unesp), Alves, Ana Liz Garcia [UNESP] |
| Jazyk: | portugalština |
| Rok vydání: | 2017 |
| Předmět: | |
| Zdroj: | Repositório Institucional da UNESP Universidade Estadual Paulista (UNESP) instacron:UNESP |
| Popis: | Submitted by VITOR HUGO DOS SANTOS null (vitor.hugo13@gmail.com) on 2017-04-12T19:23:14Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Vitor Hugo dos Santos.pdf: 1557681 bytes, checksum: 0670c2ac9c6bfaa6524c97fb45620d69 (MD5) Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-17T16:58:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 santos_vh_me_bot_par.pdf: 643625 bytes, checksum: c54491816c96b4d055a1b67b80f6bbb9 (MD5) Made available in DSpace on 2017-04-17T16:58:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 santos_vh_me_bot_par.pdf: 643625 bytes, checksum: c54491816c96b4d055a1b67b80f6bbb9 (MD5) Previous issue date: 2017-02-17 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Animais com lesão na cartilagem articular, decorrente da osteoartrite, apresentam-se como um desafio para a Medicina Veterinária, pois o reparo cartilagíneo nunca é completo quando técnicas convencionais de tratamento são utilizadas. Os avanços médicos e pesquisas relacionadas têm mostrado crescente interesse na utilização da terapia celular com células tronco mesenquimais derivadas da membrana sinovial (CTMMS) no tratamento destas lesões, buscando proporcionar total reparo da cartilagem lesada e promover a imunomodulação necessária para o controle do processo inflamatório. Além disso, existem dúvidas quanto à persistência, comportamento das células e a migração a outros locais inflamados. Desta forma este estudo teve como objetivo cultivar e avaliar a viabilidade de CTMMS encapsuladas em um arcabouço tridimensional composto de hidrogel de alginato (HA). Adicionalmente avaliar a migração celular utilizando o nanocristal Qtracker 655. Para isso, fragmentos de membrana sinovial foram coletados da articulação metatarsofalangeana de equinos por cirurgia astroscópica, submetidos à digestão enzimática e cultivados em monocamadas. As células foram encapsuladas em várias concentrações: 104; 204; 504; 105; 205 células em solução de alginato de sódio a 1,5% (w/v). Em seguida, fez-se o processo de gelatinização em CaCl2 (102 mM), permitindo a formação do HA, com posterior cultivo em meio DMEM Knockout durante quatro semanas. A viabilidade, proliferação e diferenciação das células foram realizadas através da dissolução das microcápsulas em citrato de sódio e contagem com azul de tripan, e a diferenciação através dos cortes histológicos corados com hematoxilina e eosina (HE) e azul de toluidina (AT). Para avaliar a migração celular in vivo utilizou-se a citometria de fluxo até os 21 dias e cortes histológicos em microscopia de fluorescência aos sete dias. Houve um aumento no número e na viabilidade das CTMs durante as quatro semanas de cultura nas microcápsulas com 104, 105 e 205 células. Através das análises histológicas dos HAs corados com azul de toluidina e HE foi possível observar a distribuição definida dos condrócitos no hidrogel, assemelhando-se a grupos isógenos e formação de matriz territorial. As células migraram expressivamente para membrana sinovial, sendo encontradas também em estruturas adjacentes, comprovando a quimiotaxia pela inflamação. Este estudo demonstrou a eficiência do HA como arcabouço para ser utilizado na cultura de CTMMS mantendo a viabilidade e estimulando a diferenciação condrogênica e o nanocristal mostrou ser eficiente na marcação das CTMMS, não alterando a sua viabilidade, permitindo avaliação da migração celular in vivo na articulação dos equinos. Animals with joint cartilage damage resulting from osteoarthritis present a challenge for Veterinary Medicine, since cartilage repair is never complete when conventional treatment techniques are used. Medical advances and related research have shown increasing interest in the use of cell therapy with mesenchymal stem cells derived from the synovial membrane (MSCSM) in the treatment of these lesions, seeking to provide total repair of injured cartilage and to promote the immunomodulation necessary to control the inflammatory process. In addition, there are doubts about the persistence, behavior of cells and migration to other inflamed sites. In this way, this study aimed to cultivate and evaluate a viability of MSCSM encapsulated in a three-dimensional scaffold composed of alginate hydrogel (HA) 655. For this, fragments of synovial membrane were collected from the metatarsophalangeal joint of horses by astroscopic surgery, submitted to enzymatic digestion and cultured in monolayers. The cells were resuspended in various concentrations: 104 ; 204 ; 504 ; 105 ; 205 cells in 1.5% (w/v) sodium alginate solution. The gelatinization process was then carried out in CaCl2 (102 mM), allowing the formation of HA, with subsequent culturing in DMEM Knockout medium for four weeks. Cell viability, proliferation and differentiation were performed by dissolving microcapsules in sodium citrate and counting with trypan blue, and differentiation through histological sections stained with hematoxylin and eosin (HE) and toluidine blue (AT). To evaluate cell migration in vivo, flow cytometry was used up to 21 days and histological sections under fluorescence microscopy at 7 days. There was an increase in the number and viability of MSCs during the four weeks of culture in the microcapsules with 104 , 105 and 205 cells. Through the histological analysis of HAs stained with toluidine blue and HE it was possible to observe the defined distribution of chondrocytes in the hydrogel, resembling isogenic groups and formation of a territorial matrix. The cells migrated expressively to synovial membrane, being also found in adjacent structures, proving chemotaxis by inflammation. This study demonstrated the efficiency of the HA as a scaffold to be used in the culture of MSCMS maintaining viability and stimulating the chondrogenic and nanocrystal differentiation was shown to be efficient in the labeling of the MSCMS, not altering its viability, allowing evaluation of cellular migration in vivo the equine joint. |
| Databáze: | OpenAIRE |
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