Imunossupressão causada por domínios repetitivos presentes em antígenos do Trypanosoma cruzi

Autor: Carlos Andrés Toro Acevedo
Přispěvatelé: Santuza Maria Ribeiro Teixeira, Ester Roffê Santiago, Ana Maria Caetano de Faria, Alexandre de Magalhães Vieira Machado
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2017
Předmět:
Zdroj: Repositório Institucional da UFMG
Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)
instacron:UFMG
Popis: Repetições de aminoácidos estão presentes em proteínas de todos os organismos vivos; no entanto, vários protozoários parasitos intracelulares possuem maior quantidade dessas repetições nos seus proteomas, o que poderia estar relacionado com a capacidade de imuno-evasão. A proteína ribossômica L7a do Trypanosoma cruzi contém repetições na porção N terminal. Para investigar o papel dessa repetição foram produzidas as proteínas recombinantes completa (TcL7a) e suas versões truncadas; TcL7aRep, contendo somente a parte repetitiva, e TcL7aΔRep, contendo a parte não repetitiva. Após imunizações com essas proteínas, camundongos BALB/c foram infectados com tripomastigotas sanguíneos do clone CL Brener de T. cruzi. A imunização com a proteína TcL7a inteira protegeu animais contra a infecção pelo T. cruzi pois diminuiu tanto a parasitemia quanto a mortalidade, enquanto a imunização com a parte não repetitiva TcL7aΔRep não teve efeito significativo. Entretanto, a imunização com a parte repetitiva TcL7aRep levou ao aumento da parasitemia e da mortalidade nos animais infetados. Para elucidar o mecanismo pelo qual a imunização com TcL7aRep tornou os camundongos mais susceptíveis à infecção, avaliamos a produção de anticorpos específicos anti-T. cruzi nos animais infectados. Evidenciou-se uma menor quantidade de anticorpos IgM e IgG total contra o extrato proteico de T. cruzi em animais imunizados e infectados em comparação aos animais infectados do grupo controle (não imunizados). Análises histopatológicas de tecido de coração mostraram menor quantidade de infiltrado celular inflamatório e maior número de ninhos íntegros de amastigotas quando comparados com o grupo controle. Após estimulação de esplenócitos in vitro com Concanavalina A e α-CD3 observou-se que, quando incubados com a proteína contendo as repetições TcL7aRep, os linfócitos T CD4+, T CD8+ e linfócitos B CD19+ proliferaram menos do que os controles. Além disso, a incubação por 24 horas com a TcL7aRep antes do estímulo resultou em uma diminuição na expressão de moléculas de superfície importantes para a resposta imune adaptativa, tais como CD3, CD4, CD8 e CD25 em linfócitos do baço de camundongos não infectados. Nossos dados indicam portanto que os animais imunizados com TcL7aRep ou esplenócitos incubados in vitro com essa proteína apresentam uma resposta indicativa de imunossupressão, o que poderia explicar a maior susceptibilidade dos animais imunizados com a porção repetitiva da proteína à infecção pelo T. cruzi. Assim como estudos anteriores relacionando o papel de outras repetições presentes em antígenos do T. cruzi, como as repetições SAPA presentes nas transialidases, os dados desse trabalho corroboram a existência de mecanismos de imunossupressão causada por repetições presentes em antígenos do parasito como parte das estratégias desenvolvidas por esse patógeno que permitem sua sobrevivência no hospedeiro mamífero. Amino acid repeats are present in all organisms. However, the predicted proteomes of intracellular parasites have a higher content of repetitive domains than the proteomes of extracellular parasites or free living microorganisms. The presence of repeat domains has been associated with the immune-evasion capacity of different pathogens. The ribosomal Trypanosoma cruzi L7a protein contains a repeat domain at its N-terminus. To investigate the role of this repeat domain, we produced three versions of the recombinant, corresponding to the entire protein (TcL7a) and the truncated version that contains only the repeats (TcL7aRep) or the non-repetitive region (TcL7aΔRep). Immunization of BALB/c mice with these three proteins, followed by challenge with bloodstream trypomastigotes of the CL Brener clone showed that immunization with the complete TcL7a protein protected the animals against T. cruzi infection since parasitemia and mortality were diminished, while the immunization with the non-repetitive TcL7aΔRep did not result in a significant effect. Surprisingly, immunization with the repeat domain TcL7aRep results in exacerbated parasitemia and mortality in all infected animals. To elucidate the mechanism by which the TcL7aRep augments the susceptibility of mice to infection, we evaluated the specific antibody production against T. cruzi whole cell extracts in sera from infected animals. We observed lower levels of IgM and total IgG antibodies against the protein extract of T. cruzi in immunized and infected animals compared with infected animals that were not immunized (control). After splenocyte in vitro stimulation with concanavalin A and α-CD3, we observed that, when splenocytes are incubated with TcL7aRep, CD4+ and CD8+ T lymphocytes and CD19+ B lymphocytes were less able to proliferate than control lymphocytes. Additionally, a 24 hours incubation with TcL7aRep before stimulation resulted in a decrease of surface important molecules for adaptive response, such as CD3, CD4, CD8 and CD25 in lymphocytes from spleen obtained from non-infected mice. Taken together, our data indicates that animals immunized with TcL7aRep or splenocytes incubated in vitro with this antigen present an immunossupressive phenotype, which could explain the higher susceptibility to infection with T. cruzi of all animals immunized with the repeat domain. Similar to other studies that investigated the role other T. cruzi antigens, such as trans-sialidase containing the SAPA repeats, our study correlates the existence of an immunossupressive mechanism caused by parasite antigenic repeats as part of its strategy to survive inside the mammal host.
Databáze: OpenAIRE
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