Estudio cualitativo de errores innatos del metabolismo usando resonancia magnética nuclear protónica en un centro de referencia de Bogotá D.C

Autor: Pulido Ochoa, Ninna Fernanda
Přispěvatelé: Echeverri Peña, Olga Yaneth, Wist, Julien, Cifuentes Cifuentes, Yolanda, Zuluaga, Martha Viviana
Jazyk: Spanish; Castilian
Rok vydání: 2018
Předmět:
Zdroj: Repositorio Universidad Javeriana
Pontificia Universidad Javeriana
instacron:Pontificia Universidad Javeriana
Popis: ANTECEDENTES: El diagnóstico bioquímico de los Errores Innatos del Metabolismo de molécula pequeña se basa en la detección de metabolitos específicos mediante GC-MS y HPLC. Con base en la capacidad de hacer un análisis más global de los metabolitos, la espectroscopía de RMN (1H-RMN) es una alternativa para un abordaje diagnóstico inicial de estos trastornos. Este trabajo proporciona evidencia sobre perfiles específicos para pacientes con acidemias orgánicas y aminoacidopatías en comparación con sujetos no afectados, usando NMR-400 MHz. MÉTODOS: Se analizaron 36 controles y 17 muestras de orina patológica (180 μL de tampón KH2PO4 1,5M pH 7,0, 540 μL de muestra de orina con estándar interno TMSP-d4 0,5Mm) usando un Bruker Avance III de 400 MHz. Los datos se analizaron usando MESTRENOVA10 y SIMCA P-14. Finalmente, la asignación del cambio químico del metabolito se realizó en comparación con la literatura y las bases de datos como HMDB, BMRB y otros. RESULTADOS: Los análisis de orina en un NMR operado a 400 MHz permitieron una clara discriminación entre individuos sanos y afectados. Se observaron metabolitos característicos para la mayoría de las patologías evaluadas e incluso algunos metabolitos que no son detectados por GC-MS o HPLC como isovaleril-alanina y cetoleucina en IVA y MSUD, respectivamente, que sólo aparecen en el estado agudo de estas enfermedades. Además, se describe el perfil por 1H-RMN de la Deficiencia de Holocarboxilasa Sintetasa, una enfermedad para la cual, en nuestro conocimiento, no hay informes de perfiles específicos por esta técnica. DISCUSIÓN: Estos resultados evidenciaron que la 1H -NMR operada a 400 MHz permitió detectar perfiles altamente sugestivos de EIM e incluso distinguir entre diferentes estados de la enfermedad, aunque en algunos casos el diagnostico no es conclusivo. Con base en nuestras observaciones, consideramos que este análisis puede ser útil para fortalecer la impresión diagnóstica antes de utilizar las técnicas gold standar, lo que permite ahorrar tiempo y dinero; especialmente cuando el diagnóstico diferencial incluye varios grupos de EIM. Convocatoria 06 de 2015 de la Vicerrectoria de Investigación de la Pontificia Universidad Javeriana (convocatoria interna - apoyo a proyectos interdisciplinarios de investigación para el fortalecimiento de grupos de investigación). BACKGROUND: The biochemical diagnosis of IEM involving small molecule metabolism, is based on detection of specific metabolites using GC-MS and HPLC. Based on the capacity to make a more global analysis of metabolites, NMR Spectroscopy (1H-NMR), is an alternative for an initial diagnostic approach of these disorders. This work provides evidence on specifics profiles for patients with organic acidemias and aminoacidopathies compared to unaffected subjects, using NMR-400 MHz. METHODS: 36 controls and 17 pathological urine samples (180 µL KH2PO4 buffer 1,5M pH 7.0; 540 µL of urine sample with internal standard TMSP-d4 0,5Mm) were studied using a 400 MHz Bruker Avance III. Data was analyzed using MESTRENOVA10 and SIMCA P-14. Finally, assignment of metabolite’s chemical shift was done by comparison with literature and databases like HMDB, BMRB and others. RESULTS: NMR-400 MHz, urine analyses allowed clear discrimination between healthy and affected individuals. Characteristic metabolites were observed for most pathologies evaluated and even some metabolites that are not detected by GC-MS or HPLC like isovaleryl-alanine and Ketoleucine in IVA and MSUD, respectively, which only appear in the acute state of these diseases. Additionally, we described the 1H-NMR profile of Holocarboxylase Synthetase Deficiency, a disease for which in our knowledge, there are no reports of 1H-NMR specific profiles. DISCUSSION: Our results evidenced that, although NMR-400 MHz analyses of urine samples were able to detect profiles highly suggestive of IEM and even distinguish among different states of the disease, it may be insufficient to stablish an specific diagnosis in some cases, where 1H-NMR profile may be unconclusive. Based on our observations, we consider that this analyses may be useful to strengthen the diagnostic impression before using gold standards techniques, which results in time and money saving especially when differential diagnosis includes various groups of IEM. Magíster en Ciencias Biológicas Maestría
Databáze: OpenAIRE
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