Descripción de la gonadogénesis e identificación del periodo de diferenciación sexual de Totoaba macdonaldi

Autor: ARELY ELIAM PAREDES MARTINEZ
Přispěvatelé: BENJAMIN BARON SEVILLA, BLANCA CLAUDIA FARFAN .
Jazyk: Spanish; Castilian
Rok vydání: 2018
Předmět:
Zdroj: Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada
CICESE
Repositorio Institucional CICESE
Popis: La totoaba (Totoaba macdonaldi) es un pez marino endémico del Golfo de California declarada en peligro de extinción desde 1976. Esta especie ha sido objeto de diversos estudios orientados a su cultivo principalmente con fines de repoblamiento pero aún no se ha descrito su gonadogénesis o identificado el periodo lábil durante el cual la gónada sexualmente indiferenciada pudiera ser inducida a la conversión sexual. En este estudio se describe la gonadogénesis de T. macdonaldi mediante análisis histológico y con el apoyo de la expresión relativa del gen cyp19a se delimita el período en el que ocurre la diferenciación sexual. Para los análisis de la expresión relativa de la aromatasa gonadal se aislaron y secuenciaron fragmentos de cDNA de cyp19a de T. macdonaldi (Tmcyp19a) así como de siete posibles genes de mantenimiento (tubb, actb, EIF3, QM-like, ND1, RPS35, eTIF3g). A partir de los 29 días después de la eclosión (DDE) y hasta los 44 DDE (longitud total 1.2 a 4.6 cm) se detectó la presencia de células germinales en las gónadas indiferenciadas. La primera evidencia de diferenciación se observó a los 51 DDE (longitud total 6.3 a 8 cm) con la formación de la cavidad ovárica la cual transcurre en dirección céfalo caudal, pero en organismos de 69 DDE (longitud total 8.4 a 9.7 cm) se hizo evidente que este proceso no ocurre de manera simultánea en ambas gónadas. En ejemplares de 85 a 161 DDE (longitud total 10.4 a 13 cm y 16.5 a 18.5 cm) el desarrollo de la gónada se mantuvo sin cambios notables. En organismos de 15 meses de edad se identificaron ovarios y testículos diferenciados. En los ovarios se identificaron ovogonias, ovocitos primarios en fase I y ovocitos primarios en fase II. La estructura de los testículos se caracterizó por la presencia de células germinales y espermatogonias. Para los análisis de la expresión relativa de la aromatasa gonadal (Tmcyp19a) se utilizó como gen de referencia interna β-tubulina (Tmtubb). La aromatasa gonadal se expresó en todas las etapas del desarrollo pero los niveles de intensidad en las bandas de amplificación por PCR fueron significativamente mayores en algunos juveniles de 36 DDE en adelante. Esto sugiere que al igual que en otros teleósteos, en T. macdonaldi la expresión de la aromatasa gonadal precede a la diferenciación fenotípica de la gónada y que en ensayos para feminizar la gónada el período lábil a considerar es alrededor de los 36 DDE y se extiende hasta los 51 DDE. The totoaba (Totoaba macdonaldi) is a marine fish endemic to the Gulf of California declared as an endangered species since 1976. This species has been the subject of several studies focused on its cultivation mainly for repopulation purposes but its gonadogenesis has not yet been described or identified the labile period during which the sexually undifferentiated gonad could be induced to sexual conversion. In this study the histological gonadogenesis of T. macdonaldi is described and with the support of the relative expression of the cyp19a gene, the period of sex differentiation is delimited. For the analysis of the relative expression of the gonadal aromatase, cDNA fragments of cyp19a of T. macdonaldi (Tmcyp19a) were isolated and sequenced, as well as seven housekeeping genes (tubb, actb, EIF3, QM-like, ND1, RPS35, eTIF3g). From 29 days post hatching (DPH) and up to 44 DPH (total length range 1.2 to 4.6 cm) only germ cells were present in the undifferentiated gonads. The first evidence of differentiation was observed at 51 DPH (total length 6.3 to 8 cm) with the formation of the ovarian cavity , which occurs in caudal to cephalic direction, but in 69 DPH organisms (total length 8.4 to 9.7 cm) it became evident that this process does not occur simultaneously in both gonads. In specimens 85 to 161 DPH (total lengths 10.4 to 13 cm and 16.5 to 18.5 cm, respectively) the development of the gonad remained without notable changes. In organisms 15 months-old, differentiated ovaries and testicles were identified. In the ovaries ovogonias, primary oocytes in a phase I and primary oocytes in phase II were present. The structure of the testes was characterized by the presence of germ cells and spermatogonia. To assess the relative expression of gonadal aromatase (Tmcyp19a), β-tubulin (Tmtubb) was used as the internal reference gene. Gonadal aromatase was expressed at all stages of development but intensity levels of the RT-PCR amplification bands were higher in some juveniles from 36 DPH onwards. This suggests that, as in other teleosts, in T. macdonaldi the expression of gonadal aromatase precedes the phenotypic differentiation of the gonad and that in bioassays for the feminization of the gonad the labile period to consider starts around 36 DPH and extends to 51 DPH.
Databáze: OpenAIRE
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