Expression, purification and analysis of the catalytic activity of SMases D from Austwickia chelonae, Arcanobacterium haemolyticum, Corynebacterium pseudotuberculosis and Trichophyton rubrum

Autor: Romano, Fernanda Serrano
Přispěvatelé: Universidade Estadual Paulista (Unesp), Mariutti, Ricardo Barros [UNESP]
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2020
Předmět:
Zdroj: Repositório Institucional da UNESP
Universidade Estadual Paulista (UNESP)
instacron:UNESP
Popis: Submitted by Fernanda Serrano Romano (fernanda.romano@unesp.br) on 2020-10-06T16:16:24Z No. of bitstreams: 1 dissertação corrigida final RBM_biblioteca.docx: 4427580 bytes, checksum: c3af2680a6adc8a539a4e986e05b1e78 (MD5) Rejected by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br), reason: Solicitamos que realize correções na submissão seguindo as orientações abaixo: 01 - O arquivo depositado está no formato Word, é necessário que o arquivo contendo a sua dissertação esteja no formato PDF e não esteja protegido. 02 - Na Capa e folha de rosto, solicitamos retirar o ponto final do título. 03 – No rodapé da CAPA e FOLHA DE ROSTO colocar (sem o –SP): São José do Rio Preto 2020 04 - Solicitamos corrigir a descrição da natureza da pesquisa na FOLHA DE ROSTO e APROVAÇÃO: Dissertação apresentada como parte dos requisitos para obtenção do título de Mestre em Microbiologia, junto ao Programa de Pós-Graduação em Microbiologia do Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas da Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho", Câmpus de São José do Rio Preto. 05 – A data de defesa deve ser colocada no rodapé da FOLHA DE APROVAÇÃO: São José do Rio Preto 03 de julho de 2020 06 - Informamos que é imprescindível que coloque a Ficha Catalográfica(obrigatória segundo a ABNT NBR 14724), gerada pelo sistema. Você poderá elaborar a sua ficha acessando o Sistema Gerador de Fichas Catalográficas online; https://www.ibilce.unesp.br/#!/biblioteca/servicos-oferecidos/normalizacao/ficha-catalografica/ 07 - Nos agradecimentos: segundo a Portaria CAPES nº 206, de 4 de setembro de 2018, todos os trabalhos que tiveram financiamento/BOLSA CAPES deve constar a expressão EXATA: "O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001". 08 – Segundo a norma ABNT NBR 10520, a epígrafe deve ser referenciada. 09 - Resumos: a correta grafia é Keywords, iniciar cada palavra-chave (português e inglês) com maiúscula e separa-las com ponto. 10 - Solicitamos retirar do SUMÁRIO a indicação: Resumo e Abstract, pois segundo a norma ABNT NBR 6027 os elementos pré-textuais não podem constar no sumário. 11– Solicitamos corrigir no sumário e no texto os APÊNDICES são elementos pós-textuais e devem ser inseridos após as Referências e identificados por letra maiúscula sendo necessário também escrever o título. Ex: 6 Conclusão 62 Referências 63 Apêndice A - Título 75 12 – Solicitamos corrigir no sumário e no texto, o correto é Referências e não Referências Bibliográficas. 13 – O arquivo está com muitas páginas desconfiguradas, há varias figuras cujo título está em uma página e o restante na página seguinte. 14 - Segundo a ABNT NBR14724, os títulos das seções primárias devem começar em nova folha, na parte superior. 15 – Segundo a norma ABNT NBR 6023, as referências devem ser elaboradas em espaço simples, alinhadas à margem esquerda do texto e separadas entre si por uma linha em branco de espaço simples. Sugerimos que siga as orientações do template para as correções, na página da Biblioteca, link: https://www.ibilce.unesp.br/#!/biblioteca/servicos-oferecidos/normalizacao/estrutura-do-trabalho-academico/ Lembramos que o arquivo depositado no Repositório deve ser igual ao impresso, o rigor com o padrão da Universidade se deve ao fato de que o seu trabalho passará a ser visível mundialmente. Agradecemos a compreensão on 2020-10-07T18:55:26Z (GMT) Submitted by Fernanda Serrano Romano (fernanda.romano@unesp.br) on 2020-12-01T17:29:29Z No. of bitstreams: 2 dissertação corrigida final RBM_biblioteca.docx: 4427580 bytes, checksum: c3af2680a6adc8a539a4e986e05b1e78 (MD5) dissertação corrigida final FSR_biblioteca.pdf: 2523963 bytes, checksum: 5e9ad2b1baf1689a431004af334a2d57 (MD5) Approved for entry into archive by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br) on 2020-12-01T20:26:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 romano_fs_me_sjrp.pdf: 2523963 bytes, checksum: 5e9ad2b1baf1689a431004af334a2d57 (MD5) Made available in DSpace on 2020-12-01T20:26:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 romano_fs_me_sjrp.pdf: 2523963 bytes, checksum: 5e9ad2b1baf1689a431004af334a2d57 (MD5) Previous issue date: 2020-07-03 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A esfingomielinase D (SMase D) é uma hidrolase fosfórica que cliva esfingomielinas em ceramida e fosforilcolina, alterando a fluidez, permeabilidade e cargas da membrana citoplasmática além de estar relacionada à necrose de macrófagos e inflamação pulmonar. Além disso, é conhecida por ser uma enzima dermonecrótica, que permite a disseminação patogênica pelo hospedeiro. Embora muitas vezes classificadas como fosfolipases D, não apresentam a sequência HKD conservada na família dessas enzimas, as quais podem ser encontradas nos organismos Trichophyton rubrum, Arcanobacterium haemolyticum, Austwickia chelonae e Corynebacterium pseudotuberculosis, além de outros organismos. Esses quatro micro-organismos tiveram seus protocolos de expressão e purificação em larga escala estabelecidos e análises de viabilidade celular utilizando linhagens de células HaCaT demonstraram o potencial de toxicidade desses quatro organismos e permitiram encontrar um possível inibidor (doxiciclina) para futuros testes in vivo. Estudos de catálise enzimática por RMN demonstram o padrão de velocidade catalítica dessas proteínas na presença do substrato lisofosfatidilcolina (LPC). Sphingomyelinase D (SMase D) is a phosphoric hydrolase that cleaves sphingomyelins in ceramide and phosphorylcholine, changing the fluidity, permeability and cytoplasmic membrane loads, in addition to being related to macrophage necrosis and pulmonary inflammation. In addition, it is known to be a dermonecrotic enzyme, which allows pathogenic dissemination by the host. Although they are often classified as phospholipases D, they do not have the HKD sequence conserved in the family of these enzymes, which can be found in the organisms Trichophyton rubrum, Arcanobacterium haemolyticum, Austwickia chelonae and Corynebacterium pseudotuberculosis, in addition to other organisms. These four microorganisms had their large scale expression and purification protocols established and cell viability analyzes using HaCaT cell lines demonstrated the toxicity potential of these four organisms and allowed to find a possible inhibitor (doxycycline) for future in vivo tests. Studies of enzymatic catalysis by NMR demonstrate the pattern of catalytic rate of these proteins in the presence of the substrate lysophosphatidylcholine (LPC). CAPES: 001
Databáze: OpenAIRE
Externí odkaz: