Detecção da proteína p53 em células leucêmicas por citometria de fluxo e Western blot

Autor: Cavalcanti Júnior, Geraldo Barroso, Scheiner, Marcos Antonio Mauricio, Vasconcelos, Flavia da Cunha, Dobbin, Jane de Almeida, Klumb, Claudete Esteves, Maia , Raquel C.
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2004
Předmět:
Zdroj: Revista Brasileira de Cancerologia; Vol. 50 No. 3 (2004): July/Aug./Sept; 191-202
Revista Brasileira de Cancerologia; Vol. 50 Núm. 3 (2004): jul./ago/sept.; 191-202
Revista Brasileira de Cancerologia; v. 50 n. 3 (2004): jul./ago.set.; 191-202
Revista Brasileira de Cancerologia
Instituto Nacional de Câncer José Alencar Gomes da Silva (INCA)
instacron:INCA
ISSN: 2176-9745
Popis: Introduction: The p53 protein plays a crucial role in the cell cycle control, DNA damage repair and induction of apoptosis in genetically unstable cells. The Western blot is the most utilized methodology for p53 detection, but it requires lots of time to be executed and is a very elaborated technique. Nowadays, flow cytometry (FC), a more practical technique is being used for p53 detection. Objectives and methodology: to compare the results of p53 detection by FC and WB in leukemic cells. We used samples from 3 patients with acute lymphoid leukemia (ALL), 5 with acute myeloid leukemia (AML), 6 with chronic myeloid leukemia (CML) and 8 with chronic lymphoid leukemia (CLL). The positive (5) and negative (4) controls, used in both methods were leukemic cells lineages. Lymphocytes from 40 healthy donors were used as control for negative labeling in FC. The FC was performed after labeling with p53 monoclonal antibody and the WB by usual protocol. Results and conclusion: We verified agreement in the results in 82% of leukemic samples and in 100% of cell lineages. FC+/WB+ results were observed in patients with poor prognosis such as in CLL / Richter Syndrome, CML in blastic crisis and in the majority of AML. Although WB is considered as standard methodology for p53 detection, our results show that FC can be satisfactorily used for detection of this protein in leukemic cells. Introdução: A proteína p53 desempenha uma função crucial no controle do ciclo celular, reparo do DNA e na indução de apoptose em células geneticamente instáveis. O Western blot (WB) é o método preconizado para detecção dessa proteína, no entanto é técnica demorada e trabalhosa. Atualmente, a citometria de fluxo (CF) também tem sido empregada na detecção da proteína p53 tendo a vantagem da praticidade. Objetivos e Metodologia: Comparar os resultados obtidos pela CF e WB na detecção da proteína p53 em células leucêmicas. Empregamos amostras de 3 pacientes com leucemia linfóide aguda (LLA), 5 com leucemia mielóide aguda (LMA), 6 com leucemia mielóide crônica (LMC) e 8 com leucemia linfóide crônica (LLC). Os controles positivos (5) e negativos (4), para os dois métodos, foram linhagens de células leucêmicas. Juntamente com o controle de marcação negativa, na técnica de CF, utilizamos linfócitos de 40 doadores de sangue. A análise pela CF foi realizada após a marcação com anticorpo monoclonal anti-p53 e o WB por técnica convencional. Resultados e Conclusões: Observamos concordância nos resultados em 82% das amostras leucêmicas e em 100% nas linhagens celulares. CF+/WB+ foram observados em pacientes com evolução desfavorável tais como na LLC / Síndrome de Richter, LMC em crise blástica e na maioria das LMA. Apesar do WB ser considerado um método padrão para a detecção da p53, nossos resultados indicam que a CF pode ser empregada satisfatoriamente na detecção dessa proteína em amostras leucêmicas.
Databáze: OpenAIRE
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