Síntese, análise conformacional, avaliação do potencial de liberação em implante de PLGA e ensaios de atividade antiangiogênica e de citotoxicidade do peptídeo PSAIWF-NH2
| Autor: | Lídia Pereira Barbosa Cordeiro |
|---|---|
| Přispěvatelé: | Jarbas Magalhães Resende, Elionai Cassiana de Lima Gomes, Amanda Silva de Miranda, Mariana Ramos de Almeida |
| Jazyk: | portugalština |
| Rok vydání: | 2021 |
| Předmět: |
Citotoxicidade
Angiogênese Cytotoxicity Síntese Chrorioallantoic membrane Peptídios Implant Implante Cromatografia líquida de alta eficiência Retina Espectrometria de massa Neovascularização Copolímeros Peptide synthesis Análise conformacional Vasos sanguíneos Doenças Retinopatia Membrana corioalantoica Angiogenesis Retinopathy Síntese de peptídeos Química orgânica |
| Zdroj: | Repositório Institucional da UFMG Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG) instacron:UFMG |
| Popis: | CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Este trabalho relata a obtenção do peptídeo PSAIWF-NH2 por estratégia 9fluorenilmetoxicarbonila (Fmoc) de síntese em fase sólida, sendo que este demonstrou previamente, em ensaios realizados pelo grupo de pesquisa, potencial atividade antiangiogênica. A caracterização por cromatografia líquida de alta eficiência por detecção ultravioleta (CLAE-UV) e espectrometria de massas MALDI-ToF confirmaram a obtenção do peptídeo em altos rendimentos e pureza. As análises por espectroscopia de dicroísmo circular evidenciaram que o peptídeo não adota conformação preferencial em meio aquoso, nem em soluções de 2,2,2,-trifluoroetanol (TFE) e água e nem na presença de micelas de n-docecilfosfocolina (DPC). Por outro lado, ele apresenta estruturação significativa na presença de vesículas unilamelares grandes (LUVs) de POPC:POPG, indicando que o peptídeo possivelmente interage com a membrana aniônica, ou que as mesmas ainda induzem algum tipo de estruturação. O ensaio em membrana corioalantoica de embrião de galinha (CAM) demonstrou melhor perfil de inibição angiogênica do peptídeo na concentração intermediária testada, o que indica relação não linear na dose-resposta, corroborando o seu potencial antiangiogênico. Além disso, o ensaio in vitro em células do epitélio pigmentar da retina (ARPE-19) não mostrou toxicidade do peptídeo nas condições testadas.Foram produzidos implantes do peptídeo em matriz de poli (ácido lático-co-ácido glicólico) – PLGA. Ao serem testados quanto à liberação do hexapeptídeo, os implantes se mostraram eficientes em liberá-lo de forma prolongada e controlada ao longo de 39 dias. O perfil foi marcado por um burst de liberação, com decaimento e manutenção das concentrações, que se mantiveram em níveis comparáveis aos de inibição angiogênica testados no ensaio CAM. This work reports the synthesis of the peptide PSAIWF-NH2 using the 9fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc) solid phase approach. In a previous investigation performed by our research group, this peptide showed considerable antiangiogenic activity in vivo. Characterizations by high-performance liquid chromatography with ultraviolet detection (HPLC-UV) and mass spectrometry MALDI-ToF confirmed the peptide obtention at higher yield and purity. The conformational preferences of the peptide were investigated by circular dichroism spectroscopic. No conformational preference is observed neither in aqueous environments nor in 2,2,2,-trifluoroethanol (TFE) aqueous solutions. The absence of conformational preference also takes place in the presence of n-Docecylphosphocholine (DPC). On the other hand the spectra of the peptide in the presence of POPC:POPG (3:1) large unilamellar vesicles (LUVs) are consistent with peptide β-conformations, which indicate either affinity of the peptide to anionic membrane or that the anionic liposomes somehow induce this conformational preference. The in vivo assay using chorioallantoic membrane of chicken embryos (CAM) revealed the best profile of angiogenic inhibition at an intermediate concentration, indicating non-linear association between dose and response, corroborating the antiangiogenic potential of the peptide. Furthermore, in vitro assay at pigment epithelium retinal cells (ARPE-19) did not show peptide toxicity at tested concentrations. Finally, the peptide was incorporated into poly(lactic acid-co-glycolic acid) - PLGA implants. As for the hexapeptide release, these implants seemed very efficient in providing controlled and sustained release of the peptide for 39 days. The profile was marked by an initial burst of release and a subsequently decay to concentration levels compatible to that of the angiogenic inhibition observed in the investigated CAM model. |
| Databáze: | OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
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