Validation of a multiplex syndromic system for the molecular diagnostic of bacterial meningitis

Autor: Evangelista, Patricia Salles Estrela
Přispěvatelé: Setti, Joao Antonio Palma, Couto, Gustavo Henrique, Berte, Siliane Denise
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2021
Předmět:
Zdroj: Repositório Institucional da UTFPR (da Universidade Tecnológica Federal do Paraná (RIUT))
Universidade Tecnológica Federal do Paraná (UTFPR)
instacron:UTFPR
Popis: Estima-se que haja anualmente mais de 1,2 milhões de casos de meningite bacteriana em todo o mundo, com coeficientes de incidência e letalidade que variam de acordo com a região, país, faixa etária e agente etiológico. No Brasil, o número de casos referentes às meningites de origem bacteriana é preocupante, pois além de sua rápida evolução e letalidade, representam em número de casos o segundo maior número de registros, com uma representatividade de 27,4%, de acordo com os dados de vigilância epidemiológica. Assim, considerando que a identificação etiológica e o diagnóstico precoce são essenciais para a definição de tratamentos antimicrobianos adequados, instituição de medidas de controle e até mesmo para o monitoramento do perfil epidemiológico da doença, e que, durante a pesquisa bibliográfica, foi identificado a existência de uma quantidade ordinária de plataformas totalmente automatizadas disponíveis no mercado, em conjunto com uma ausência de compatibilidade entre plataformas e painéis moleculares multiplex. O presente trabalho teve como objetivo validar o painel molecular multiplex XGEN MULTI MB (Fab.: Mobius LifeScience, Ref. XG-MB-MB-24) para uso em conjunto com a plataforma totalmente automatizada BD MAX™ System (Fab.: BD Diagnostics, Ref. BD MAX™ System), formando assim um sistema sindrômico multiplex utilizado para diagnóstico molecular de meningites bacterianas, denominado ao longo do trabalho como SSM MB. Como layout de validação, foram consideradas seis etapas de ensaios analíticos, compostas por ensaios de robustez, sensibilidade analítica, especificidade analítica, precisão e exatidão/acurácia, somando um total de 162 testes realizados. Para realização dos ensaios, foram utilizadas amostras previamente conhecidas como negativas para os patógenos em análise, em conjunto com padrões sintéticos de concentração conhecida, específicos para detecção dos alvos detectados no painel molecular multiplex XGEN MULTI MB. Após a avaliação dos resultados obtidos verificou-se que o sistema sindrômico multiplex SSM MB apresentou: curvas de amplificação em formato exponencial, resultados de detecção válidos e valores de fluorescência de acordo com o padrão observado na rotina utilizando um ganho de 80 (ensaios de robustez); capacidade de detectar os patógenos Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae e Haemophilus influenzae até uma concentração mínima de aproximadamente 13 cópias/µL (ensaios de sensibilidade analítica); capacidade de realizar detecções apenas do patógeno alvo, em canal específico, sem indícios de interferência de fluorescência em outros canais ópticos (ensaios de especificidade analítica); capacidade de detectar medições sucessivas de um mesmo analito, em condições operacionais inalteradas e em condições operacionais distintas, com resultados concordantes e dentro dos critérios de aceite proposto (ensaios de precisão); capacidade de detectar valores de medição próximos aos resultados aceitos como verdadeiramente corretos (ensaios de exatidão/acurácia). Deste modo, concluiu-se que o sistema sindrômico multiplex SSM MB atendeu aos objetivos previamente propostos, com resultados considerados como satisfatórios em todas as etapas de ensaio realizadas. Tanto que, posteriormente, os dados gerados neste trabalho também serão utilizados como base pelo fabricante, para atualização de registro do produto e inclusão da plataforma BD MAX™ System (Fab.: BD Diagnostics, Ref. BD MAX™ System) como equipamento compatível com o kit, perante o órgão regulamentador (ANVISA). It is estimated that anually there are more than 1.2 million cases of bacterial meningitis worldwide, with coefficients of incidence and lethality that vary according to region, country, age group and etiologic agent. In Brazil, the number of cases referring to bacterial meningitis is worrying, because besides its rapid evolution and lethality, it represents, in number of cases, the second largest number of records, with a representativeness of 27.4% according to the epidemiological surveillance data. Also, considering that the etiological identification and early diagnosis are essential for the definition of appropriate antimicrobial treatments, institution of control measures and monitoring of the disease’s epidemiological profile, along with the fact that during the bibliographic search an ordinary amount of fully automated platforms available on the market were found and a lack of compatibility between platforms and multiplex molecular panels was identified. The present study aimed to validate the multiplex molecular panel XGEN MULTI MB (Fab.: Mobius LifeScience, Ref. XG-MB-MB-24) for the use with a fully automated platform BD MAX™ System (Fab.: BD Diagnostics, Ref. BD MAX ™ System), forming together a multiplex syndromic system used for the molecular diagnosis of bacterial meningitis, later described as SSM MB. As validation layout, six stages of analytical tests were considered, including tests of robustness, analytical sensitivity, analytical specificity, precision, and accuracy, summing a total of 162 tests performed. For the testing procedure, previously known negative samples for the pathogens under analysis were used, along with synthetic standards of known concentration specific for the targets’ detection of the multiplex molecular panel XGEN MULTI MB. After the result’s evaluation, it was verified that the SSM MB multiplex syndromic system presented: amplification curves on exponential format, valid detection results and fluorescence values according to the pattern observed in the routine when using a gain of 80 (robustness tests); ability to detect Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, and Haemophilus influenzae at a minimum concentration of approximately 13 copies/µL (analytical sensitivity tests); ability to perform detections only from the target pathogen, on specific channels and without evidence of fluorescence interference on anoother optical channels (analytical specificity tests); ability to detect successive measurements of the same analyte, under unaltered operating conditions and under different operating conditions, with consistent results and within the proposed acceptance criteria (precision tests); ability to detect measurement values, close to results accepted as truly correct (accuracy tests). Threfore, it was concluded that the SSM MB multiplex syndromic system met the objectives previously proposed with results considered satisfactory in all the tests performed. Such as that later, the data generated on this study will also be used by the manufacturer to update the product registration, adding the BD MAX™ System platform (Fab.: BD Diagnostics, Ref. BD MAX™ System) as an equipment compatible with the kit, at the correspondent regulatory authorities (ANVISA).
Databáze: OpenAIRE
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