Estudo dos efeitos das condições ambientais tropicais ao longo do tempo de exposição sobre o DNA de dentes humanos para genotipagem forense

Autor: Emiliano, Gustavo Barbalho Guedes
Přispěvatelé: Souza, Lélia Batista de, Silva, Luiz Antônio Ferreira da, Oliveira, Rogério Nogueira de, Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira, Medeiros, Silvia Regina Batistuzzo de
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2013
Předmět:
Zdroj: Repositório Institucional da UFRN
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN)
instacron:UFRN
Popis: As condições ambientais interferem nos processos de decomposição de corpos e remanescentes humanos. Variáveis associadas ao clima e ao solo como alta temperatura, umidade elevada, incidência da radiação solar, composição do solo e o pH do solo podem degradar o DNA de amostras biológicas coletadas de locais de crimes e de corpos não identificados. Os dentes representam uma importante fonte de DNA, pois são os tecidos mais rígidos do corpo humano e mais resistente à putrefação. Os dentes são coletados quando o corpo encontra-se esqueletizados ou quando os outros tecidos estão em pequenas quantidades e putrefeitos. A genotipagem forense com STRs (Short Tandem Repeat) é um método padrão que apresenta alto poder de discriminação entre indivíduos e a amplificação de amostras degradadas. A presente pesquisa objetivou avaliar a quantidade e qualidade do DNA de amostras dentárias expostas às condições ambientais de clima e de solo tropicais por T0, T1 (4 meses), T2 (9 meses) e T3 (24 meses). A amostra foi constituída por 65 dentes molares hígidos de indivíduos com média de idade de 24 anos (dp ± 3). Os dentes foram limpos física-quimicamente e pulverizados criogenicamente. O DNA dentário foi extraído através do protocolo de extração AFDIL, quantificados em PCR em tempo real através do kit Quntifiler® Human DNA Quantification e os STRs autossômicos (FGA, D16S539, D7S820, D13S317, D3S1358, Penta E, D18S51, D12S391, TH01, D19S433, CSF1PO, TPOX, vWA, D5S818, D2S1338, SE33 e a amelogenina) amplificados em reações de PCR multiplex. As análises de variância (ANOVA) e o pós-teste de Tukey mostraram haver diferenças significativas (p ≤ 0,05) nas médias de quantidades de DNA entre o grupo controle e grupo experimental nos tempos de exposição T1, T2 e T3 e no grupo superfície entre T1 e T3. A quantificação foi possível em 92% (n = 60) das amostras. A diferença nas médias de amplificação dos loci de STRs foi significativa (p < 0,05) nos grupos superfície, argila e areia ao longo dos tempos T1, T2 e T3. Em cinco amostras do tempo T3 não houve amplificação. Os três maiores marcadores CSF1PO, FGA e Penta E amplificaram em 60% das amostras da superfície, 94% da argila e 87% da areia no tempo T1. Os três menores marcadores D5S818, D19S433 e D3S1358 amplificaram em 94% das amostras da superfície, 94% da argila e 100% da areia no tempo T1. A amelogenina amplificou em 86% das 65 amostras e 47% no grupo experimental no tempo T3. Houve variação significativa (p < 0,05) para as médias das áreas da amelogenina entre o grupo controle e o grupo experimental em T1 e T3. Para a área do marcador CSF1PO houve variação significativa (p < 0,05) entre o grupo controle e o grupo experimental no tempo T1. Face ao exposto, conclui-se que a submissão dos dentes às condições de clima e de solo foi determinante para a redução significativa da quantidade média de DNA no primeiro tempo de exposição T1 (4 meses) e os STRs podem ser indicados eficientemente para genotipagem com até 4 meses de exposição às condições de clima e de solo tropicais. The environmental conditions interfere with the decomposition process of bodies and human remains. Variables associated with the climate and soil as high temperature, high humidity, solar radiation incidence, soil composition and soil pH can degrade DNA from biological samples collected from crime scenes and unidentified bodies. The teeth represent an important source of DNA, as they are the most rigid tissues of the human body and more resistant to decay. The teeth are collected when the body is skeletal and other tissues when they are in small amounts and decomposing. Genotyping with forensic STRs is a standard method that has a high power of discrimination between individuals and amplification of degraded samples. The current study aimed to assess the quantity and quality of DNA from dental samples submitted to the environmental conditions of climate and soil in tropical T0, T1 (4 months), T2 (9 months) and T3 (24 months). The sample consisted of 65 molar teeth healthy individuals with a mean age of 24 years (SD ± 3). The teeth were cleaned and sprayed chemical-physical cryogenically. The DNA was extracted by dental extraction protocol AFDIL, quantified by real-time PCR kit Quntifiler ® Human DNA Quantification and autosomal STRs (FGA, D16S539, D7S820, D13S317, D3S1358, Penta E, D18S51, D12S391, TH01, D19S433, CSF1PO, TPOX, VWA, D5S818, D2S1338, amelogenin and SE33) amplified in PCR multiplex. Analyses of variance (ANOVA) and Tukey post-test showed significant differences (p ≤ 0.05) in the amounts of DNA between the control group and the experimental group in exposure times T1, T2 and T3 and the surface group between T1 and T3. The quantification was possible in 92% (n = 60) samples. The average amplification of STR loci was significant (p < 0.05) groups at the surface, clay and sand over the T1, T2 and T3. In 5 samples T3 time there was no amplification. The three largest markers CSF1PO, Penta E FGA and amplified in 60% of the surface of the sample, 94% clay and 87% of the sand in time T1. The lower three markers D5S818, D3S1358 and D19S433 amplified in 94% of samples of the surface of the clay 94% and 100% of the sand in time T1. The amelogenin amplified in 86% of 65 samples and 47% in the experimental group at time T3. Significant variation (p
Databáze: OpenAIRE
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