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(Tesis) Magíster en Biotecnología En los últimos años, las células madres mesenquimales (MSCs del ingles mesenchymal ste'm cells) han adquirido una gran relevancia en el mundo de la terapia celular debido a su disponibilidad y su capacidad de modular el sistema inmune. Sin embargo, esta capacidad de modulación depende de las fuentes desde donde son aisladas, y del método utilizado para su obtención. Un tipo de MSCs que ha adquirido relevancia son aquellas que se encuentran en el fluido menstrual (MenSC), debido a su gran disponibilidad y simpleza en la obtención. Sin embargo, su capacidad de inmunodulación y su regulación aún no está bien descrita. El hecho de que estén presentes en un lugar anatómicamente expuesto a cambios fisiológicos y hormonales cíclicos, hacen suponer, que las condiciones regenerativas de estas células presentarían propiedades únicas en comparación a otras MSCs y que podrían estar involucradas en procesos que requieran una modulación inmunológica a nivel endometrial. El objetivo de este proyecto fue estudiar las propiedades fenotípicas e inmunomodulatorias de MSCs aisladas de fluido menstrual (MenSC). Con este propósito se obtuvieron muestras de fluido menstrual, y se aislaron MSCs, utilizando el gradiente de densidad con Ficoll-Paque, para su posterior cultivo. Una vez cultivadas las células se realizaron ensayos tanto de clonogenicidad como proliferación, necesarios para su caracterización y se verificaron los marcadores de superficie específicos para MSCs. También se evaluó el efecto de proliferación y propiedades inmunomodulatorias que presentan las MenSC en presencia de estrógeno y progesterona, hormonas presentes en el ciclo menstrual que podrían estar afectando el potencial de las MenSC de modular al sistema inmune. Para esto se realizaron ensayos que permitieron determinar el efecto que ejercerían ambas hormonas en las MenSC en presencia de hPBMC (Células mononucleares de sangre periférica humanas) alogénicos, luego se midieron los factores inmunosupresores mediante qRT- PCR y FACS en condiciones in vitro. Los resultados sugieren que tanto estrógeno como progesterona no potencian las capacidades inmunomoduladora y proliferativa de las MenSCs, implicando su baja capacidad de modular el sistema inmune con respecto a otra fuente de MSCs, sin embargo, el hecho de que su obtención sea a través de un proceso no invasivo, mes a mes y que presente una alta tasa de proliferación en pasajes bajos permiten postular a las MenSCs como una poderosa fuente en terapias celulares que no impliquen modulación del sistema inmune. In recent years, the mesenchymal stem cells (MSCs) have acquired great relevance in the world of cell therapy because of their availability and their ability to modulate the immune system. However, this capacity of modulation will depend on the sources and methods used for their isolation, One type of MSCs that has become important are those found in menstrual fluid (MenSCs), due to its availability and simplicity in obtaining them. However, their ability to inmunodulate, and how they are regulated, is still not well described. The fact that MenSC are present in an anatomical location subject to physiological and cyclic hormonal changes, allows to assume that the regenerative conditions of these cells would present unique properties compared to other MSCs and might be involved in processes requiring immunomodulation at an endometrial level. The objective of this project was to study the phenotypic and immunomodulatory properties of MSCs isolated from menstrual fluid. For this purpose, samples of menstrual fluid were obtained and MSCs were isolated using density gradient with Ficoll-Paque for further cultivation. Once the cells have been grown in culture, clonogenicity and proliferation assays were performed, for characterization and identification of specific surface markers for MSCs. The effect of proliferation and immunomodulatory properties of MenSCs in the presence of estrogen and progesterone, hormones present in the menstrual cycle that could be affecting the potential of modular MenSCs the immune system, were also assessed. Assays to determine the effect of both hormones in MenSCs in the presence of hPBMC (mononuclear cells from peripheral blood human) allogeneic, then immunosuppressive factors by qRT-PCR and FACS were measured under different conditions in vitro. The results suggest that both estrogen and progesterone do not potentiate the immunomodulatory and proliferative capabilities MenSCs, implying its low ability to modulate the immune system with respect to another source of MSCs. However, the obtention of MenSC through a non-invasive process, that occur monthly and with a high rate of proliferation at low passages, transform MenSCs in a potential powerful source in cell therapies that not involve modulation of the immune system. |
