Методы анализа l-аргининa
| Jazyk: | ruština |
|---|---|
| Rok vydání: | 2014 |
| Předmět: | |
| Zdroj: | Biotechnologia Acta. |
| ISSN: | 2410-776X 2410-7751 |
| Popis: | Охарактеризованы современные физикохимические и энзиматические методы количест венного определения L-аргинина. У большинст ва известных методов анализа L-аргинина есть недостатки: низкая селективность (химические), громоздкость и высокая стоимость оборудования (физико-химические), недостаточная стабильность (операционная и при хранении биосенсоры), чувствительность к интерферирующему влиянию сопутствующих веществ. Поэтому разработка высокоселективных и чувствительных методов определения концентрации L-аргинина, в частности энзиматических, для усовершенствования системы мониторинга его уровня в клинической диагностике и пищевой промышленности является актуальной проблемой. Представлены результаты собственных исследований по разработке и апробации эффективных энзиматических, в том числе биосенсорных, методов анализа L-аргинина с использованием аргиназы І печени человека, выделенной из клеток рекомбинантных дрожжей Hansenula рolymorpha NCYC-495 pGAP1-HsARG1 ( leu2car1 Sc:LEU2). Аргиназа (КФ 3.5.3.1; L-аргинин-амидиногидролаза) играет решающую роль в гидролитическом расщеплении L-аргинина до L-орнитина и мочевины. Результаты апробации предложенных амперометрического и потенциометрического биосенсоров на основе аргиназы І, а также энзиматических методов со спектрофотометрической и флуоресцентной детекцией продукта продемонстрировали их эффективность для экспресс-анализа L-аргинина в фармацевтических препаратах. Разработанные методы могут быть перспективными для определения L-аргинина в пищевых продуктах (соках и винах), а также в сыворотке крови для диагностики и контроля при лечении некоторых видов онкологических заболеваний. Высокая селективность и простота предложенных методов позволят существенно упростить процедуру анализа и заменить используемые в настоящее время низкоселективные химические и дорогостоящие хроматографические методы. Physicochemical and enzymatic methods of quantitative L-arginine estimation are described. A variety of detection procedures for L-arginine analysis have been developed. The majority of the frequently used approaches are marked by poor precision, low sensitivity and selectivity. These methods are time-consuming, expensive and require skilful labor techniques, so it needs to develop novel highly selective and sensitive ones for improvement of L-arginine monitoring in clinical diagnostics and food industry. Experimental data concerning development and testing of effective enzymatic methods of L-arginine determination, including biosensors, are presented. All proposed methods are based on human liver arginase I isolated from the recombinant yeast strain Hansenula polymorpha NCYC-495 pGAP1-HsARG1 (leu2car1 Sc:LEU2). Arginase I (EC 3.5.3.1; L-arginine amidinohydrolase), a key enzyme of the urea cycle, catalyses the conversion of L-arginine to ornithine and urea. An effectiveness of the proposed enzymatic methods for L-arginine assay, as amperometric and potentiometric biosensors so as enzymatic methods with spectrophotometric and fluorometric detection of the product, was demonstrated on the samples of commercial pharmaceuticals. These methods seem to be prospective for L-arginine analyses in food industry (juices and wines) and in medicine, for diagnostics and drug control in blood serum under treatment of cancer malignances. Hence, the proposed L-Arg selective and simple methods would be convenient and useful in the future for routine clinical analysis and food quality control. |
| Databáze: | OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
|