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Mémoire de Diplôme d'Etudes Spécialisées (DES) tenant lieu de thèse d'exercice.; Sanfilippo syndrome type B is a rare disease with sometimes extremely severe clinical signs. The patient care is often delayed as the disease diagnostic is often mistaken with behavioural disorders such as autism or hyperactivity. As new treatments for mucopolysaccharidosis type III B syndrome are currently reaching the market, we aimed to develop effective diagnostic and screening techniques to best meet the patients and clinicians meets. We optimized in this study the diagnostic method by measuring the enzymatic activity of N-acetylGlucosaminidase (or NAGLU) produced by leukocytes. Furthermore, considering the diagnostic wandering in this pathology, we developed a screening technique by measuring the enzymatic activity of NAGLU on Dried Blood Spot (DBS). This technique has the advantage of being less restrictive and easier to perform than the leukocyte diagnostic method, and would allow a wider use in routine. However this technique will not replace the standard technique (NAGLU leukocyte assay), but will exclude a diagnosis of Sanfilippo syndrome type B or drive the patient to the reference diagnostic method. In the view of their accreditation process for routine laboratory work, we performed the validation in scope B of these two exams, in compliance with the normative applicable requirements in the field of medical biology examinations (NF EN ISO 15189). This work demonstrated that these methods comply with clinical and biological requirements.; La maladie de Sanfilippo de type B est une maladie de faible prévalence mais dont la clinique peut être extrêmement sévère. Souvent confondue avec des troubles comportementaux tels que l’autisme ou l’hyperactivité, la prise en charge des patients souffre souvent d’un retard de diagnostic. De nouveaux traitements de la mucopolysaccharidose de type III B arrivant sur le marché, nous avons vu l’opportunité de développer des techniques de diagnostic et de dépistage performantes afin de mieux répondre aux besoins des cliniciens et des patients. Au cours de ce travail, nous avons ainsi optimisé la technique de diagnostic par mesure de l’activité enzymatique de la N-acétylGlucosaminidase (ou NAGLU) sur leucocytes. D’autre part, et au vu de l’errance diagnostic dans cette pathologie, nous avons développé une technique de dépistage par mesure de l’activité enzymatique de la NAGLU sur goutte de sang séchée ou Dried Blood Spot (DBS). Celle-ci présente l’avantage d’être moins contraignante et plus facile à réaliser que la méthode diagnostic sur leucocytes. Cela permettrait une utilisation plus large en routine, néanmoins cette technique ne se substituera pas à la technique de référence (dosage de la NAGLU sur leucocytes), mais permettra un diagnostic d’exclusion ou une orientation vers la méthode diagnostique de référence. En vue de leur accréditation au sein du laboratoire, nous avons réalisé la validation de méthode en portée B de ces deux examens, dans le respect des exigences normatives en vigueur pour les examens de biologie médicale (NF EN ISO 15189). Ces travaux ont permis de démontrer la conformité de ces méthodes vis-à-vis des exigences clinico-biologiques. |
