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A monitorização do risco ambiental e de saúde pública num determinado local associado ao uso excessivo de combustíveis fósseis, necessita de uma adequação das metodologias e de um maior conhecimento sobre o comportamento destes poluentes no meio ambiente. O petróleo é uma mistura complexa composta principalmente por hidrocarbonetos, sendo estes considerados um dos principais poluentes do planeta, causando efeitos adversos nos ecossistemas. No entanto, existem naturalmente organismos capazes de resistir à presença desses poluentes e de metabolizá-los em substâncias inofensivas ou não tóxicas, definindo se assim a biorremediação, através dos microrganismos hidrocarbonoclásticos. Desta forma, este trabalho surge na continuação da linha de investigação de processos biodegradativos associados à biorremediação dos solos contaminados com produtos petrolíferos, de seis locais do estuário do rio Tejo, aplicando-se neste estudo a técnica de atenuação natural em conjunto com a bioestimulação, de forma a acelerar o processo de biorremediação. As amostras representativas do solo foram tratadas de duas formas diferentes: uma por imersão do solo em meio Bushnell-Haas (BH), e outra onde se procedeu a uma lavagem prévia do solo com cloreto de sódio (NaCl) 0,9% (m/v), e só depois se adicionou a solução lavagem (suspensão) ao meio BH. Realizaram-se análises microbiológicas (observação das colónias e caracterização da diversidade morfológica e bioquímica das bactérias selecionadas), monitorizando o comportamento da população de microrganismos com potencial de biorremediação ao longo do processo de biorremediação por bioestimulação. Foram estudadas duas concentrações (0,4% e 0,6%) dos poluentes gasolina, hexano e tolueno. As colónias obtidas revelaram ser bacilos Gram-positivas e negativos na maioria das amostras, e o crescimento em meio seletivo permitiu identificar Pseudomonas aeruginosa na maioria das amostras. A taxa de biorremediação foi determinada utilizando o indicador redox 2,6-diclorofenolindofenol (DCPIP); na presença e na ausência do emulsificante Tween 80. Neste ponto, as taxas de biorremediação mais altas que se obtiveram para as amostras com suspensão foram para a gasolina 62% (Alburrica), para o hexano 66% (Trafaria), para o tolueno teve-se 60% (Trafaria); no que concerne as amostras com solo, para a gasolina obteve-se 68% (Alburrica), para o hexano 65% (Algés), e para o tolueno 79% (Algés). No geral, as bactérias foram eficientes na capacidade de degradação dos hidrocarbonetos adicionados ao meio de cultura, verificando-se taxas de biodegradação aeróbia de hidrocarbonetos mais elevadas com a adição de emulsificante ao meio. Conclui-se assim que, a adição de emulsificantes permitiu prolongar o metabolismo degradativo dos poluentes por parte dos microrganismos, que neste processo atuaram como sendo a única fonte de carbono. Monitoring environmental and public health risks in a given location associated with the excessive use of fossil fuels requires the adequacy of methodologies and a greater knowledge of the behaviour of these pollutants in the environment. Petroleum is a complex mixture composed mainly of hydrocarbons, considered one of the main pollutants on the planet, causing adverse effects on ecosystems. However, natural organisms can resist these pollutants and metabolise them into harmless or non-toxic substances, thus defining bioremediation, through hydrocarbonclastic microorganisms. This work continues the investigation of biodegradative processes associated with the bioremediation of soils contaminated with petroleum products from six sites of the Tejo River estuary, applying in this study the technique of natural attenuation together with biostimulation, in order to accelerate the process of bioremediation. Representative soil samples were treated in two different ways: one by soil immersion in Bushnell-Haas (BH) medium, and another where the soil was previously washed with 0.9% (w/v) sodium chloride (NaCl), and only then the wash solution (suspension) was added to the BH medium. Microbiological analyses were performed (observation of colonies and characterization of the morphological and biochemical diversity of the selected bacteria), monitoring the behaviour of the population of microorganisms with bioremediation potential throughout the bioremediation process by biostimulation. Two concentrations (0.4% and 0.6%) of the pollutants gasoline, hexane and toluene were studied. The obtained colonies were revealed to be Gram-positive and negative bacilli in most samples. The growth in a selective medium allowed the identification of Pseudomonas aeruginosa in most samples. The bioremediation rate was determined using the redox indicator 2,6-dichlorophenolindophenol (DCPIP); in the presence and absence of the emulsifier Tween 80. At this point, the highest bioremediation rates obtained for the samples with suspension were for gasoline 62% (Alburrica), for hexane 66% (Trafaria), for toluene 60% (Trafaria); regarding the samples with soil, for gasoline 68% (Alburrica), for hexane 65% (Algés), and toluene 79% (Algés). In general, the bacteria were efficient in degrading hydrocarbons added to the culture medium, with higher rates of aerobic biodegradation of hydrocarbons with an emulsifier. Thus, we conclude that adding emulsifiers prolonged the degradative metabolism of pollutants by microorganisms, which acted as the only carbon source in this process. |
