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Tese de Doutoramento em Ciências Veterinárias na Especialidade de Saúde Animal, área científica de Sanidade Animal ABSTRACT - Cetacean strandings are frequent along the Portuguese coastline and stranded specimens provide a unique opportunity to study disease and infectious disease agents in cetacean populations. Morbillivirus is particularly important in cetaceans for its ability to cause disease and for its high mortality rates. Herpesviruses are also particularly interesting since they are known to have close co-evolutionary paths with their hosts and for establishing latent infections that can resurge with any stressors of the immune system. This work aimed at investigating the epidemiology and pathophysiology of cetacean morbillivirus and herpesvirus. Furthermore, we aimed at establishing a profile of cytokine genes expression in healthy common dolphins and evaluate the possibility of using that tool to assess immunological shifts in this species. A molecular survey for dolphin morbillivirus revealed striped dolphins stranded in the Portuguese and Galician coasts have a prevalence of approximately 20% of positive individuals, higher than prevalence found for common dolphins (1%). A phylogeographic pattern was detected in the phylogenetic analysis with viral sequences from the Canary Islands more similar to those from the Mediterranean than samples from Portugal and Galicia. Herpesvirus infection was also detected in cetaceans, and both alpha and gammaherpesvirus were detected. Our work reported infection by herpesvirus in common dolphins for the first time. Co-infection with different strains of herpesvirus was detected, as well as co-infection with morbillivirus and Toxoplasma gondii. Relative expression of cytokine genes (IL1β, IL6, TNFα, IL12, IL4,IL10, and IFN-γ) was also determined for a group of healthy common dolphins. Relative expression was also determined in two sick common dolphins. Our results showed that IL1β, TNFα and IFN-γ were the cytokines with higher relative expression in healthy individuals and that Il-10 was the most expressed gene in the two sick animals, with a downregulation of all other cytokines. This work clarified the epidemiology of morbillivirus in cetacean species stranded along the Portuguse coastline, contributed to the variability of herpesvirus sequences in the gamma and alphaherpesvirus subfamilies and supports the evidence that profiling cytokine markers may serve as a tool to assess immunological shifts in stranded cetaceans RESUMO - AVALIAÇÃO DA INFECÇÃO POR MORBILIVÍRUS E HERPESVÍRUS EM CETÁCEOS ARROJADOS NA COSTA PORTUGUESA - Os arrojamentos de cetáceos são frequentes na costa Portuguesa e representam uma janela de oportunidade única para estudar as doenças e os agentes infecciosos nestas populações de cetáceos. Os morbilivírus revelaram-se particularmente importantes em cetáceos pela sua capacidade de causar doença grave e pela sua alta taxa de mortalidade. Os herpesvírus também são particularmente interessantes por co-evoluirem com o hospedeiro e também por serem capazes de estabelecer latência, passando por períodos de reactivação secundária a episódios de stress imunitário. Foram nossos objectivos investigar a epidemiologia e patofisiologia de morbilivírus e herpesvírus em cetáceos. Além disso, quisemos estabelecer um perfil de expressão de citoquinas em golfinhos comuns saudáveis e testar a possibilidade desse perfil servir como ferramenta para detectar shifts imunitários nesta espécie. Um rastreio molecular realizado para o morbilivírus dos golfinhos revelou que os golfinhos riscados arrojados na costa Portuguesa e Galega têm uma prevalência de cerca de 20% de animais positivos, mais alta que aquela encontrada para golfinhos comuns (1%). Um padrão filogeográfico foi observado na análise filogenética, com sequências virais provenientes das Canárias mais semelhantes às do Mediterrâneo do que as sequências provenientes de Portugal e da Galiza. Infecções por Herpesvirus também foram detectadas (tanto de alfa como gamaherpesvírus). O nosso trabalho detectou herpesvírus em golfinhos comuns pela primeira vez. Detectámos ainda co-infecções com várias estirpes de herpesvírus, bem como com morbilivírus e Toxoplasma gondii. A expressão relativa de genes de diferentes citoquinas (IL1β, IL6, TNFα, IL12, IL4,IL10, e IFN-γ). foi também determinada para um grupo de golfinhos comuns saudáveis. Esta expressão relativa tambem foi determinada em dois golfinhos comuns doentes. Os nossos resultados mostraram que em animais saudáveis as citoquina com maior expressão são IL1β, TNFα e IFN-γ, enquanto nos animais doentes houve um aumento de expressão de il-10 com diminuição de expressão de todas as outras citoquinas. O nosso trabalho clarificou a epidemiologia dos morbilivírus em cetáceos arrojados na costa Portuguesa, contribuiu para a variabilidade das sequências de herpesvírus nas subfamílias de alfa e gamaherpesvírus e suporta a hipótese de utilizar o perfil de citoquinas como uma ferramenta para detectar shifts imunitários em golfinhos arrojados N/A |
