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Tese de Doutoramento em Ciências Veterinárias na Especialidade de Ciências Biológicas e Biomédicas, área científica - Morfologia e Função ABSTRACT - Improving feline mammary carcinoma treatment through HER2-related immunochemotherapy agents and biomarkers - The feline mammary carcinoma (FMC) is a common tumour, with the HER2-positive and triple-negative being the most aggressive subtypes, as in women. This tumour is usually diagnosed belatedly, with scarce information about its development, and limited therapeutic options beyond mastectomy, presenting the cat a low overall survival time. Thus, this project was developed in order to improve therapeutic options, as well as, to reveal new tumour diagnosis/prognosis biomarkers, related to HER2 protein and taking advantage for the extensive knowledge in protocols used in humans. In order to disclose different therapeutic options for diseased cats, several drugs (TKi – lapatinib and neratinib; mAbs – trastuzumab and pertuzumab; ADC – T-DM1; and mTOR inhibitor – rapamycin, as adjuvant) and combined protocols were tested using FMC cell lines (CAT-M, FMCp and FMCm). These assays revealed promising antiproliferative effects and conserved molecular responses, inducing lower phosphorylation levels of target proteins, when TKi were used, and apoptosis, when mAbs and ADC drugs were evaluated. In parallel, combined protocols presented excellent synergistic responses. Moreover, feline tumour clinical tissue samples were analysed in order to identify her2 mutations as prognosis markers or therapy resistance indicators. The obtained results correlates a her2 mutation, in exon 18 (c.19573 A>T), to larger tumour sizes, a poor prognosis feature. Furthermore, any of the mutations found are described, in woman, as inducing therapeutic resistance. Additionally, considering the close relationship between obesity with increased leptin levels and the development of HER2-positive breast cancer, in woman, and since in cat obesity is a frequent nutritional disorder, the leptin/leptin receptor (ObR) axis was evaluated as possible tumour biomarker. Interestingly, cats with mammary carcinoma presented a decreased free leptin index, being the higher leptin levels associated to poor prognostic features, and serum ObR levels were correlated to an immunosuppressive status. In conclusion, the results obtained support the use of therapeutic drugs targeting the HER2, in order to improve cats’ prognosis, which could contribute for an advance in the veterinary oncology practice. Furthermore, leptin and ObR were suggested as tumour biomarkers, being proposed its use as putative adjuvant therapeutic targets RESUMO - Melhorar o tratamento do carcinoma mamário felino através de imunoquimioterapia dirigida para o HER2 e novos biomarcadores tumorais - O carcinoma mamário felino (CMF) é um tumor frequente, sendo os subtipos HER2- positivo e triplo-negativo os mais agressivos, tal como na mulher. No gato, este tumor é geralmente diagnosticado num estadio avançado, havendo pouca informação sobre o seu desenvolvimento e opções terapêuticas limitadas, para além da mastectomia, o que resulta num curto tempo de sobrevivência. Assim, este projeto foi desenvolvido de forma a melhorar as opções terapêuticas, na gata, bem como identificar novos biomarcadores tumorais, relacionados com a proteína HER2 e tirando vantagem dos protocolos validados em medicina humana. De forma a encontrar diferentes opções terapêuticas para o tumor de mama, diversos fármacos (TKi – lapatinib e neratinib; mAbs – trastuzumab e pertuzumab; ADC – T DM1; e inibidor da via mTOR – rapamicina, como adjuvante) e protocolos de conjugação, foram testados usando linhas celulares imortalizadas de CMF (CAT-M, FMCp e FMCm). Estes ensaios exibiram efeitos antiproliferativos promissores, apresentando mecanismos de ação conservados, induzindo baixos níveis de fosforilação das proteínas alvo, aquando do uso de TKi e, apoptose, quando os mAbs e ADC foram testados. Em paralelo, os protocolos de conjugação apresentaram excelentes respostas sinérgicas. Ainda, amostras de tecido de tumores de mama de gata foram analisadas, por forma a identificar mutações no her2, como indicadores de prognóstico, ou resistência à terapêutica. Os resultados obtidos revelaram uma mutação, no exão 18 (c.19573 A>T), associada a tumores de maiores dimensões, um fator de mau prognóstico. Além disso, nenhuma mutação caracterizada se encontra descrita na mulher, como responsável pela resistência terapêutica. Adicionalmente, considerando a correlação entre obesidade, com aumento dos níveis de leptina e o desenvolvimento do tumor de mama HER2-positivo, na mulher e, uma vez que na gata este é um problema nutricional comum, o eixo leptina/recetor (ObR) foi avaliado, como possível biomarcador tumoral. Os resultados obtidos mostraram que gatos com carcinoma mamário apresentam uma diminuição do índice de leptina livre, estando os níveis elevados de leptina associados a mau prognóstico e, os níveis séricos de ObR relacionados com um estado de imunossupressão geral. Em conclusão, os resultados obtidos suportam o uso de fármacos anti-HER2 e ainda, o uso da leptina e do seu recetor como biomarcadores tumorais e possíveis alvos adjuvantes à terapia N/A |
