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Tomaz, F., Antunes, S., Parreira, R., Domingos, A., Seixas, G.,” Characterization of Hazara virus infection in Hyalomma lusitanicum tick cell line.” Poster ID: 185. National Congress of Microbiology and Biotechnology-MicroBiotec2. 23rd – 26th November 2021 (Online Web-conference) Crimean-Congo haemorrhagic fever virus (CCHFV) (Nairoviridae, Orthonairovirus) is a tick-borne virus that causes a severe disease with high mortality rates in humans and is classified as a biosafety level (BSL) 4 pathogen. This virus is mainly transmitted by Hyalomma spp. ticks and has been increasingly detected in Europe and other CCHFV-endemic areas. Since H. lusitanicum geographical distribution encompasses the Iberian Peninsula, where recent human cases of CCHFV disease have been detected, a more comprehensive understanding of the tick-virus interactions is needed to fully realize the role this vector plays in the (re)emergence of CCHFV. As showed in previous studies, Hazara virus (HAZV) is a valid surrogate model to study CCHFV under BSL2 conditions. The aim of this thesis was to establish and characterize the infection of three tick-derived cell lines - HLE/LULS42, HAECTVM9 and ISE6 - with HAZV to elucidate the dynamics of the infection (in vitro) in the vector. Tick cell lines were maintained in parallel with HAZV grown in Vero E6 and SW-13 cells. The three tick cell lines were infected with HAZV at different multiplicities of infection and had their supernatants retrieved at several time-points post infection and later processed for RNA extraction using tri-reagent. Viral RNA was quantified using an in-house designed quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-qPCR) using a TaqMan probe targeting a region of the S segment of HAZV genome. Results obtained demonstrate that a persistent infection is formed in all three cell lines, without hampering the fitness of the tick cells. The viral titres obtained by RT-qPCR provided an image of the kinetics of the infection and show a peak of viral genomes at approximately 7-8 days post-infection. The data also shows that HLE/LULS42 – HAZV infected cells produce higher values of viral titre in all the three cell lines studied, displaying a difference in the kinetics of viral replication. Future studies are warranted in HLE/LULS42 tick cell line to study the molecular mechanisms underlying the viral persistence without damaging the host. Altogether, this work provides critical knowledge in understanding the vector-pathogen interactions and will guide future studies towards prevention and treatment of poorly studied viral threats. O vírus da febre hemorrágica da Crimeia-Congo (CCHFV) (Nairoviridae, Orthonairovirus) é um vírus transmitido por carraças responsável por uma grave doença com elevada taxa de mortalidade em humanos e é classificado como agente patogénico de nível de biossegurança (BSL) 4. Este vírus é transmitido principalmente por carraças do género Hyalomma spp. e a sua deteção na Europa e outras áreas endémicas de CCHFV tem aumentado. Visto que, a distribuição geográfica de H. lusitanicum abrange a Península Ibérica, onde foram detectados casos recentes de infeção por CCHFV, é necessária uma compreensão mais detalhada das interações entre a carraça e o vírus para melhor compreender o papel que este vetor desempenha na (re)emergência de CCHFV. Estudos prévios com o vírus Hazara (HAZV), validaram este vírus como um modelo para estudar CCHFV em condições BSL2. Esta tese teve como objectivos, estabelecer e caracterizar a infecção por HAZ, em três linhagens celulares distintas de carraças - HLE/LULS42, HAECTVM9 e ISE6 – de modo a elucidar a dinâmica de infecção (in vitro) neste vetor. As linhas celulares de carraça foram mantidas, em paralelo, com células Vero E6 e SW-13. As três linhagens celulares de carraça foram infectadas com HAZV em diferentes multiplicidades de infecção e o seu sobrenadante foi recuperado em vários pontos temporais pós-infecção, sendo posteriormente processado para extração de RNA usando tri-reagente. O RNA viral foi quantificado por meio de uma nova reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa em tempo real (RT-QPCR), usando uma sonda TaqMan, complementar a sequencia específica do segmento S do genoma de HAZV. Os resultados obtidos, evidenciam a formação de uma infecção persistente, presente em todas as três linhagens celulares, sem prejudicar a sobrevivência das mesmas. Os títulos virais obtidos através de RT-QPCR revelam um pico na deteção de genomas virais, aproximadamente 7-8 dias após a infecção. Estes resultados demonstram igualmente que a linhagem celular HLE/LULS42, infetada com HAZV apresenta os valores de título viral mais elevado em todas as três linhagens celulares estudadas, indicando uma diferença na cinética de replicação viral. É necessário realizar estudos futuros, usando a linha celular HLE/LULS42, para uma melhor compreensão dos mecanismos moleculares implícitos na manutenção da persistência da infeção viral sem danificar o hospedeiro. Concluindo, este trabalho fornece novos dados para a compreensão das interações entre vetor e agente patogénico e permitirá realizar novo estudos para a prevenção e tratamento de ameaças virais. |
