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La biología sintética representa un campo emergente de investigación que tiene como objetivo imitar y comprender los sistemas vivos y sus componentes básicos desde una perspectiva fundamental llamada ''bottom up''. En numerosos estudios, las vesículas lipídicas han sido identificadas como candidatas ideales como compartimentos capaces de imitar funcionalidades celulares, debido a la estructura, tamaño y propiedades biofísicas o bioquímicas de la bicapa lipídica.En las últimas décadas, se han desarrollado y utilizado ampliamente dispositivos microfluidos para la producción de alto rendimiento de 'droplets' y emulsiones múltiples.En este proyecto, se estudiará, probará y analizará un determinado dispositivo microfluídico como una forma de permitir la reconstrucción de células artificiales. La metodología utilizada permitirá lograr este objetivo a partir de vesículas unilamelares gigantes (GUV) y posteriormente utilizar material biológico para imitar procesos similares a células.El PDMS, el material utilizado para construir el dispositivo, será el punto de partida. Debido a sus propiedades, es necesario adaptar las condiciones y realizar algunos tratamientos antes de alcanzar la plena operatividad del chip, produciendo GUV de alto rendimiento sin necesidad de aditivos.El primer paso en el proceso de producción de GUV es la fabricación del dispositivo por medio de fotolitografía suave, curado, pelado y cortado en chips, las entradas y salidas se perforan y finalmente se unen a un portaobjetos utilizando un tratamiento de plasma. A continuación, se debe realizar un tratamiento antes de comenzar cualquier experimento. Consiste en hacer fluir selectivamente ciertas soluciones ácidas y poliméricas a través de los microcanales, con el fin de hidrofilizar las paredes y obtener una producción exitosa de emulsiones dobles de agua en aceite en agua (W/O/W). A continuación, se probarán diferentes caudales de los fluidos para finalmente alcanzar el objetivo perseguido.Después de optimizar tanto el proceso de hidrofilización como los caudales para la correcta producción de GUVs, se utilizarán diferentes soluciones como interior y exterior de las vesículas además de la fase lipídica.Finalmente, otro método de formación de GUV llamado electroformación será estudiado y probado como comparación, operando por primera vez un dispositivo automático de la empresa 'Nanion Technologies'. |
