Desarrollo de metodologías analíticas para la realización de estudios metabólicos no dirigidos en suero humano mediante espectrometría de masas de alta resolución

Autor: García Álvarez, Jorge
Přispěvatelé: González-Iglesias, Héctor
Rok vydání: 2022
Popis: Trabajo fin de Máster presentado en la Universidad de Oviedo, Máster Universitario en Ciencias Analíticas y Bioanalíticas.--Calificación: 9.7
En este Trabajo de Fin de Máster se desarrollaron dos metodologías analíticas para realizar estudios metabolómicos no dirigidos en suero humano mediante espectrometría de masas de alta resolución, con el objetivo último de llevar a cabo la identificación de biomarcadores de una enfermedad con gran prevalencia en Asturias como es el glaucoma cuya detección se lleva a cabo cuando se ha producido una importante pérdida de visión y por ello urge una detección precoz de la enfermedad. - En el cromatógrafo de gases y espectrometría de masas de alta resolución (GC-Q-TOF) se realizaron dos optimizaciones. La primera optimización consistió en evaluar diferentes métodos de precipitación de proteínas mayoritarias (MeOH, ACN, MAA, EtOH y los filtros Vivaspin®), siendo el disolvente orgánico MAA (mezcla de MeOH, acetona y ACN a partes iguales) el seleccionado porque obtuvo mejores resultados tanto en la limpieza de los blancos como en la identificación del mayor número de metabolitos con la mayor confianza. La segunda optimización consistió en evaluar diferentes silanizantes en el proceso de derivatización de las muestras (BSTFA, MSTFA y MTBSTFA), siendo el silanizante MTBSTFA el seleccionado porque obtuvo el mayor número de metabolitos identificados y una mayor reproducibilidad de los análisis. - En el cromatógrafo de líquidos y espectrometría de masas de alta resolución (LC-Q-TOF) se realizaron igualmente dos optimizaciones. Se probaron dos tratamientos de muestra y, en ambos, se evaluaron diferentes métodos de precipitación de proteínas mayoritarias (MeOH, ACN, MAA y los filtros Vivaspin®). Entre los dos se escogió el tratamiento de muestras que no requiere evaporación, empleando MeOH como disolvente orgánico para la precipitación de proteínas, al obtener los mejores resultados en la reproducibilidad de las réplicas analizadas y la identificación del mayor número de características metabólicas. - La metodología optimizada de metabolómica no dirigida, basada en GC-Q-TOF
Databáze: OpenAIRE
Externí odkaz: