| Popis: |
Σκοπός της παρούσας εργασίας ήταν η μελέτη της έκφρασης των γονιδίων NFY-C και RORA σε αδενοκαρκινώματα παχέος εντέρου και η σχέση της έκφρασης του NFY-C με την κατάσταση του γονιδίου p53. Η NFY-C πρωτεΐνη είναι μια από τις τρεις υπομονάδες του μεταγραφικού παράγοντα NFY, ο οποίος προσδένεται στους υποκινητές πολλών ευκαρυωτικών γονιδίων, περιλαμβανομένων γονιδίων που σχετίζονται με τον κυτταρικό κύκλο, επάγοντας τη μεταγραφή τους. Η ογκοκατασταλτική πρωτεΐνη p53 συνδέεται με τον NFY για τη μεταγραφή γονιδίων. Η πρωτεΐνη RORA είναι ένας υποδοχέας στεροειδών ορμονών, ο οποίος εμπλέκεται σε μια σειρά κυτταρικών διαδικασιών. Στην παρούσα μελέτη προσδιορίστηκαν τα επίπεδα mRNA του NFY-C και του RORA με ποσοτική RT-PCR σε 81 δείγματα καρκινικού ιστού παχέος εντέρου και 53 δείγματα φυσιολογικού ιστού παχέος εντέρου από ασθενείς με αδενοκαρκίνωμα παχέος εντέρου και διερευνήθηκε η σχέση τους με τα κλινικοπαθολογικά χαρακτηριστικά των ασθενών. Η πρωτεϊνική έκφραση του NFY-C προσδιορίστηκε με ανοσοϊστοχημεία σε 92 δείγματα νεοπλασματικού ιστού και 36 δείγματα φυσιολογικού ιστού παχέος εντέρου. Η κατάσταση των εξωνίων 5, 6, 7 και 8 του γονιδίου p53 προσδιορίστηκε με τη μέθοδο PCR-SSCP. Τα επίπεδα mRNA και πρωτεΐνης του NFY-C ήταν αυξημένα στους καρκινικούς ιστούς σε σχέση με τους φυσιολογικούς και διέφεραν ανάμεσα σε όγκους διαφορετικής εντόπισης. Τα υψηλά επίπεδα mRNA του NFY-C σχετίστηκαν με μεγαλύτερο ελεύθερο νόσου διάστημα (TTP) σε ασθενείς σταδίου Β. Η NFY-C πρωτεΐνη εντοπίστηκε μόνο στο κυτταρόπλασμα του κυττάρου και όχι στον πυρήνα και η έκφρασή της διέφερε ανάμεσα σε όγκους διαφορετικού σταδίου. Τα επίπεδα mRNA του RORA ήταν μειωμένα στους καρκινικούς ιστούς σε σχέση με τους φυσιολογικούς και διέφεραν ανάμεσα σε όγκους διαφορετικής εντόπισης. Η πρωτεϊνική έκφραση του NFY-C σχετίζεται με την κατάσταση του p53 ως προς την επιβίωση των ασθενών και το TTP. Συμπερασματικά, οι διαφορές έκφρασης των μορίων NFY-C και RORA υποδηλώνουν έναν πιθανό ρόλο στην καρκινογένεση του παχέος εντέρου. The aim of the current study was to evaluate NFY-C and RORA expression and investigate the correlation of NFY-C expression with p53 status in patients with colorectal carcinoma. NFY-C protein is one of the three subunits of nuclear factor Y, which binds to the promoters of many eucaryotic genes, including cell cycle – related genes, inducing their transcription. p53 tumor supressor protein binds to NFY and induce gene expression. RORA protein is a steroid hormone receptor, which is implicated in many cellular processes. In the current study NFY-C and RORA mRNA levels were evaluated by quantitative RT-PCR in 81 neoplastic colorectal tissue specimens and 53 normal tissue specimens from patients with colorectal adenocarcinoma and were analysed in relation to clinicopathological parameters of the patients. Protein expression of NFY-C was assessed by immunochemistry in 92 malignant and 36 normal samples from patients with colorectal adenocarcinoma. p53 status of the exons 5, 6, 7 and 8 was detected using PCR-SSCP method. NFY-C mRNA and protein levels were elevated in malignant tissues compared to normal tissues and were related to the primary site of the tumor. Elevated mRNA levels of NFYC of stage B patients were significantly correlated with time to disease progression. NFY-C protein was detected only in the cytoplasm and not in the nucleus and its expression was correlated with the stage of the disease. RORA mRNA levels were decreased in normal tissues compared to malignant tissues and were related to the primary site. Protein expression of NFY-C in combination with p53 status is associated with overall survival and time to disease progression of the patients. In conclusion, the differential expression of NFY-C and RORA indicates a possible role for these molecules in colon carcinogenesis. |
