Plazmidi s višestrukom antibiotičkom rezistencijom, koji se mogu upotrijebiti za kloniranje bez pojave lažnih transformanata i genetičku modifikaciju pomoću fragmenata DNA umnoženih metodom PCR

Autor: Remigiusz Arnak, Burcin Altun, Valentina Tosato, Carlo V. Bruschi
Jazyk: angličtina
Rok vydání: 2016
Předmět:
Zdroj: Food Technology and Biotechnology
Volume 54
Issue 3
ISSN: 1334-2606
1330-9862
Popis: We have constructed two plasmids that can be used for cloning as templates for PCR-based gene disruption, mutagenesis and the construction of DNA chromosome translocation cassettes. To our knowledge, these plasmids are the first vectors that confer resistance to ampicillin, kanamycin and hygromycin B in bacteria, and to geneticin (G418) and hygromycin B in Saccharomyces cerevisiae simultaneously. The option of simultaneously using up to three resistance markers provides a highly stringent control of recombinant selection and the almost complete elimination of background resistance, while unique restriction sites allow easy cloning of chosen genetic material. Moreover, we successfully used these new vectors as PCR templates for the induction of chromosome translocation in budding yeast by the bridge-induced translocation system. Cells in which translocation was induced carried chromosomal rearrangements as expected and exhibited resistance to both, G418 and hygromycin B. These features make our constructs very handy tools for many molecular biology applications.
Konstruirali smo dva plazmida koji se mogu upotrijebiti za kloniranje, kao kalupi za inaktivaciju gena pomoću fragmenata DNA umnoženih metodom PCR, mutagenezu i konstrukciju kaseta za indukciju kromosomskih translokacija. Prema našim spoznajama ovo su prvi plazmidi koji istodobno omogućavaju selekciju bakterija na ampicilinu, kanamicinu i higromicinu, te selekciju kvasca Saccharomyces cerevisiae na geneticinu (G418) i higromicinu B. Istodobno korištenje do tri antibiotičke rezistencije omogućuje precizni odabir rekombinanata i gotovo potpunu eliminaciju lažno pozitivnih transformanata, dok jedinstvena restrikcijska mjesta olakšavaju kloniranje fragmenata DNA. Osim toga, ove smo plazmide uspješno upotrijebili kao kalupe za sintezu fragmenata DNA umnoženih metodom PCR, pomoću kojih je inducirana kromosomska translokacija u kvascu sustavom BIT (engl. bridge-induced translocation). Stanice u kojima smo potaknuli translokaciju imale su očekivane kromosomske rearanžmane i bile su rezistentne na G418 i higromicin B. Plazmidi konstruirani u ovom radu mogu se jednostavno primijeniti u mnogim molekularno-biološkim istraživanjima.
Databáze: OpenAIRE
Externí odkaz: