| Popis: |
Kolorektalcancer (CRC) är en av de vanligaste förekommande cancerformerna i världen och är även den näst dödligaste typen. Vid immunohistokemiska (IHC) analyser använder man sig av markörer som cytokeratin 20 (CK20) och caudal-typ homeobox 2 (CDX2) för diagnostisering av CRC. En ytterligare markör som kan användas är special AT-rikt sekvensbindningsprotein 2 (SATB2). SATB2 är ett DNA-bindande protein som finns mellan 70-97% hos CRC-fall. Ett automatiserat färgningsinstrument, BenchMark Ultra använder IHC, där analysprincipen går ut på att den inmärkta sekundära antikroppen med pepparrotsperoxidas (HRP) binder till den primära antikroppen och dess antigen. I närvaro av 3’3-diaminobenzindine (DAB) bildas en brun färgprodukt tillsammans med väteperoxidaset (H2O2) i HRP. Syftet med arbetet var att framställa ett färgningsprotokoll för SATB2 och se hur detta protokoll fungerar vid riktiga patientfall. Två klossar med två tarmvävnader på varje och en testkontroll snittades, färgades med BenchMark Ultra och monterades för mikroskopi. Samma procedur utfördes med patientfallen. Resultatet visade att preparaten med SATB2-antikroppsspädningen 1:200 fungerade bäst med värmebehandling vid både ultraView respektive OptiView DAB. Proteasbehandling gav ospecifik infärgning. Det valda optimala protokollet med SATB2-antikroppsspädning på 1:200, värmebehandling 36 min i ultraView DAB kördes på patientfallen. Resultatet jämfördes med tidigare genomförda IHC-analyser med positivitet för CK20 och CDX2. SATB2 utföll positiv för båda patientfallen, vilket indikera på att protokollet fungerar. Slutsatsen kom blev att optimala protokollet för SATB2 är spädning på 1:200 och värmebehandling 36 min i ultraView DAB. Med detta kan SATB2 införas som ett tillägg till CK20 och CDX2 vid diagnostisering av CRC i rutinverksamheten. Colorectal cancer (CRC) is a common and the second most deadly cancer form in the world. With immunohistochemistry (IHC) analyses, biomarkers as cytokeratine 20 (CK20) and caudal type homeobox 2 (CDX2) are used for diagnosing CRC. Another biomarker that can be used is special AT-rich sequence binding protein 2 (SATB2). SATB2 is a DNA-binding protein that is found in 70-90% of CRC cases. BenchMark Ultra is an automatic staining instrument which uses IHC. The principle is that a marked secondary antibody with horse radish peroxidase (HRP) binds to the primary antibody and it’s antigen. Peroxidase (H2O2) in HRP produces a brown color with 3’3-diaminobenzindine (DAB). The aim of this study was to create a protocol for SATB2 and see how it can be used in real cases. Two embedded colon samples and a test control were cut, stained and mounted on slides for microscopy. Same process was carried out with the patient cases. Results showed samples with SATB2-antibody dilution 1:200 worked best with heat treatment in both detection kits. The protease treatment gave non-specific staining. The optimal protocol with SATB2-antibody dilution 1:200 and heat treatment for 36 min with ultraView DAB were tested on patient cases. The results of the patient cases were compared with previous conducted staining with CK20 and CDX2, SATB2 was positive for both cases. In conclusion, the protocol with dilution 1:200 and heat treatment for 36 min with ultraView DAB suited best for SATB2. SATB2 will be introduced as an additional antibody for diagnosis of CRC. |
