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Mycobacterium tuberculosis es el agente causal de tuberculosis en humanos, sin embargo, la transmisión zoonótica de Mycobacterium bovis de animales a humanos, principalmente a individuos inmunocomprometidos, es de gran impacto en salud pública. La necesidad de diseñar métodos rápidos y precisos que permitan diferenciar entre M. tuberculosis y M. bovis ha conducido al desarrollo de estrategias de identificación genotípica. El objetivo de este estudio fue evaluar el poder discriminatorio de un ensayo de reacción en cadena de la polimerasa en formato múltiple para diferenciar entre aislados clínicos de M. tuberculosis y M. bovis. Se estandarizaron condiciones para amplificación simultánea con oligonucleótidos dirigidos a secuencias de genes Rv0577 y Rv1510. Rv0577 es específico de micobacterias del Complejo M. tuberculosis y Rv1510 se localiza en regiones polimórficas (RD4) del genoma de cepas del complejo M. tuberculosis, ausentes en M. bovis y M. bovis BCG, permitiendo diferenciar entre estas dos especies del complejo M. tuberculosis. Para evaluar la especificidad del ensayo se analizaron 46 aislados clínicos. El amplicón correspondiente a Rv0577 se detectó en todos los aislados clínicos del complejo M. tuberculosis, mientras que el producto de 1033 pb Rv1510 (RD4), se observó exclusivamente en M. tuberculosis, pero no en M. bovis, ni en M. bovis BCG, demostrando la especificidad de este ensayo de RCP para identificar micobacterias del complejo M.tuberculosis y diferenciar entre M. tuberculosis y M. bovis en una única reacción de amplificación. Dada la especificidad del ensayo, éste puede ser aplicado para la identificación y diferenciación de micobacterias del complejo M. tuberculosis en muestras clínicas, para hacer control de calidad de productos derivados de animales con sospechas de infección y desarrollar estudios a gran escala de transmisión zoonótica de M. bovis en poblaciones vulnerables Mycobacterium tuberculosis is the causal agent of tuberculosis in humans, however, the zoonotic transmission of Mycobacterium bovis from animals to humans, mainly immunocompromised individuals, is of great impact in public health. The necessity to design rapid and precise methods to differentiate between M. tuberculosis and M. bovis has lead to the development of strategies of genotypic identification. The aim of this study was to evaluate the discriminatory power of a multiplex PCR assay to differentiate between M. tuberculosis and M. bovis clinical isolates. Conditions for simultaneous amplification with oligonucleótidos targeted Rv0577 and Rv1510 genes sequences were standardized. Rv0577 is specific of M. tuberculosis complex mycobacteria and Rv1510 is located in polymorphic regions (RD4) of the mycobacterial genome of M. tuberculosis complex, but is absent in M. bovis and M. bovis BCG, allowing to differentiate between M. tuberculosis complex strains. To evaluate the specificity of the PCR assay, 46 clinical isolates were analyzed. The amplicon from Rv0577 gene was detected in all of the clinical isolates from M. tuberculosis complex, whereas the 1033 pb product from Rv1510 (RD4), was exclusively observed in M. tuberculosis and was absent in M. bovis and M. bovis BCG, showing the specificity of this PCR assay to identify mycobacteria of the M. tuberculosis complex and to differentiate between M. tuberculosis and M. bovis in a single-step assay. This multiplex PCR assay can be applied to the identification and differentiation of mycobacteria of M. tuberculosis complex in clinical samples, to the quality control of products derived from animals with infection suspicions and to develop studies on great scale of zoonotic transmission of M. bovis in susceptible populations |
