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Con la finalidad de transformar genéticamente mango mediante biobalística, se bombardearon embriones somáticos de las variedades Haden, Madame Francis y Kent. Se determinó la dosis máxima de PPT en que los embriones somáticos sobreviven, cultivándolos en el medio Gamborg, Miller y Ojima en concentraciones de 0; 0,5; 1 y 2mg/l de PPT durante 3 meses y subcultivando mensualmente para evaluar peso fresco y seco. Los embriones somáticos fueron bombardeados con el plásmido CAMBIA 3201 que contiene los genes GUS y BAR, con dos tamaños de partículas de tungsteno (0,7 y 1,3µm), presión de 80psi, dos distancias de bombardeo (10,0 y 16,5cm) y 5µg de ADN. Se seleccionaron los embriones transformados en medio Gamborg, Miller y Ojima con 0,5mg/l de PPT. Las condiciones de bombardeo escogidas fueron el tamaño de partícula de 0,7µm y la distancia de bombardeo de 16,5cm. Después de tres meses de selección en las concentraciones de PPT utilizadas se hizo evidente la sobrevivencia de los embriones transformados en la variedad Kent, mientras que los embriones no transformados sobrevivieron en concentración de 0,5mg/l. Las variedades Haden y Madame Francis fueron sensibles a las condiciones de bombardeo y selección suministrados, muriendo después de este proceso. Se logró una sobrevivencia de 4% y la regeneración de 3 clones por 0,5g de tejido bombardeado. Se evidenció la actividad enzimática de la expresión transitoria del gen GUS pero no la estable y la incorporación de los genes GUS y BAR mediante PCR. In order to genetically transform mango by biobalistic, somatic embryos of the varieties Haden, Madame Francis and Kent were bombarded. The maximum dose of PPT that somatic embryos survive was determined by exposing them in Gamborg, Miller y Ojima media containing 0, 0.5, 1 and 2mg/l PPT during 3 months and subculturing every month to evaluate fresh and dry weight. The embryos were bombarded with the plasmid CAMBIA 3201 with genes GUS y BAR, using two tungsten particle sizes (0.7 and 1.3µm), pressure of 80psi, bombardment distances of 10 and 16.5cm, and 5µg of DNA. Embryos were selected using 0.5mg/l PPT as selective agent. Particle size of 0.7µm and the bombardment distance of 16.5cm were selected. After 3 months of selection in the indicated PPT concentrations, selected clones of the Kent variety survived all concentrations, while non-transformed embryos survived only at 0.5mg/l. Haden and Madame Francis varieties were sensitive to the bombardment and selection conditions, and did not survive the process. Embryo survival was 4%, and 3 clones per 0.5g of tissues bombarded were regenerated. Enzymatic activity of transient expression of the GUS gene was observed and the incorporation of the GUS and BAR genes was demonstrated by means of PCR. Com a finalidade de transformar geneticamente manga mediante biobalística, se bombardearam embriões somáticos das variedades Haden, Madame Francis e Kent. Determinou-se a dose máxima de PPT em que os embriões somáticos sobrevivem, cultivando-os no meio Gamborg, Miller e Ojima em concentrações de 0; 0,5; 1 e 2mg/l de PPT durante 3 meses e sub cultivando mensalmente para avaliar peso fresco e seco. Os embriões somáticos foram bombardeados com o plásmido CAMBIA 3201 que contêm os gens GUS e BAR, com dois tamanhos de partículas de tungstênio (0,7 e 1,3µm), pressão de 80psi, duas distâncias de bombardeio (10,0 e 16,5cm) e 5µg de ADN. Se selecionaram os embriões transformados em meio Gamborg, Miller e Ojima com 0,5mg/l de PPT. As condições de bombardeio escolhidas foram o tamanho de partícula de 0,7µm e a distância de bombardeio de 16,5cm. Depois de três meses de seleção nas concentrações de PPT utilizadas se fez evidente a sobrevivência dos embriões transformados na variedade Kent, enquanto que os embriões não transformados sobreviveram em concentração de 0,5mg/l. As variedades Haden e Madame Francis foram sensíveis às condições de bombardeio e seleção subministrados, morrendo depois deste processo. Se conseguiu uma sobrevivência de 4% e a regeneração de 3 clones por 0,5g de tecido bombardeado. Se evidenciou a atividade enzimática da expressão transitória do gene GUS mas não a estável e a incorporação dos gens GUS e BAR mediante PCR. |
