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As raízes de eucalipto (Eucalyptus urophylla) podem estar associadas a fungos como Pisolithus tinctorius, formando uma simbiose conhecida como ectomicorriza, mas também podem estar colonizadas por fungos patogênicos, como Rhizoctonia solani, agente causal do tombamento de plantas em viveiros. O objetivo deste trabalho foi verificar a presença de atividade inibitória de tripsina, uma serino-protease, em raízes de E. urophylla e a atividade de tripsina em filtrados desses fungos. Alíquotas de extrato protéico bruto de raízes de E. urophylla e frações protéicas parcialmente purificadas por cromatografia de exclusão molecular, do tipo Sephacryl S-100-HR, foram testadas para atividade inibitória de tripsina. Proteínas do extrato ou das frações, quando incubadas com o substrato BAPNA (a-benzoil-arginina-p-nitroanilida) e tripsina comercial na presença de tampão Tris-HCl 0,1 M (pH 8,0), resultou em atividade de inibidor de tripsina ao redor de 80%. Filtrados de meios de cultura de P. tinctorius e R. solani foram parcialmente purificados em cromatografia de exclusão molecular, porém atividade de tripsina sobre o substrato BAPNA não foi verificada em nenhuma das frações. Portanto, não foi possível estabelecer uma correlação direta entre o inibidor da planta e proteases dos fungos. Os resultados apresentados abrem novas perspectivas para o estudo dessas proteínas nas interações entre patógenos e simbiontes para espécies de eucalipto. Roots of eucalyptus (Eucalyptus urophylla) can be associated with fungi such as Pisolithus tinctorius, thus forming an ectomycorrhiza, or be colonized by pathogenic fungi, such as Rhizoctonia solani, agent of damping-off in nursery plants. The objective of this work was to verify the presence and activity of trypsin inhibitor, a serino-protease, in roots of E. urophylla and the activity of trypsin in filtrate of these fungi. The crude protein extract from roots and fractions partially purified by molecular sieving chromatography, using Sephacryl S-100-HR, was tested for trypsin inhibitory activity. The protein extracts or fractions, when incubated with BAPNA (a-benzoyl-arginyl-p-nitroanilide) as substrate, in presence of 0.1 M Tris-HCl buffer (pH 8,0), showed activity of trypsin inhibitor around 80%. Culture filtrates from P. tinctorius and R. solani isolates were also semi-purified by chromatography; however, no trypsin activity on BAPNA substrate was observed. Due to this, it was impossible to establish a direct correlation between the plant inhibitor and potential fungal proteases. The results presented here open new perspectives for the study of proteins in the interactions between pathogens and symbionts with eucalyptus species. |
