| Popis: |
Verschiedene Studien der vergangenen Jahre zeigen eine zentrale Bedeutung von Transkriptionsfaktoren der NF-kB/Rel-Familie bei malignen Prozessen. Diese Arbeit befasste sich mit der Charakterisierung des NF-kB-Systems bei akuter myeloischer Leukämie (AML) unter besonderer Berücksichtigung des IKK-Komplexes. Ein zentraler Punkt der vorliegenden Experimente war, den Aktivierungsstatus von NF-kB sowie des IKK-Komplexes bei AML zu charakterisieren. Im Rahmen dieser Untersuchungen konnte eine erhöhte NF-kB-Aktivität im Zellkern myeloischer Blasten nachgewiesen werden. Die Analyse der NF-kB-Dimere erbrachte ein Überwiegen von p50/p65, in einigen Fällen der M1-AML konnte aber auch die Anwesenheit von RelB und c-Rel nachgewiesen werden. Weiterhin zeigte sich in den Blasten von AML-Patienten eine erhöhte IKK-Aktivität gegenüber den entsprechenden Kontrollen. Hierbei ergaben sich keine Unterschiede zwischen Blasten aus peripherem Blut bzw. Knochenmark. Die Auswertung der IKK-Proteinkonzentrationen brachte keine signifikanten Unterschiede zwischen AML-Blasten und Kontrollen hervor. Beim Vergleich der AML-Subtypen untereinander, wurden in M4- und M5-Proben eine stärker ausgeprägte NF?kB-Aktivierung sowie eine höhere IKK-Aktivität als in Proben der Subtypen M1 und M2 beobachtet. In isolierten AML-Blasten zeigte sich nach Kultivierung ex vivo und anschließend exogener Stimulation mit TNF oder LPS eine verstärkte IKK-Aktivität, eine Degradierung von IkB, sowie eine zusätzliche Aktivierung von NF-kB. Die Vorbehandlung isolierter AML-Blasten mit dem Proteasominhibitor PSI führte zur Inhibierung des NF-kB-Systems. Die Ergebnisse dieses Projektes weisen auf eine Dysregulation IKK-assoziierter Signalübertragung bei AML und eine daraus resultierende erhöhte NF-kB-Aktivität hin. Es ist denkbar, dass sich aus den Ergebnissen dieser Arbeit richtungsweisende Ansatzpunkte für diagnostische und/oder therapeutische Konzepte für AML aber auch für andere maligne Erkrankungen eröffnen. During the last years several studies demonstrated the central role of NF-kB/Rel transcription factors in oncogenesis. In this studie we investigated the activation status of NF-kB and the IKK complex in acute myeloid leukemia (AML). Gelshift assays revealed an increased level of activated nuclear NF-kB in myeloid blasts. Supershift analysis identified p50 and p65 subunits in myeloid blast nucleus. In two cases of M1-AML a RelB and c-Rel band was additionally detected. Both bone marrow and peripheral blood blasts from AML patients showed enhanced IKK activity relative to controls, wheras the IKK protein concentrations were comperable. In addition, an increased level of IkB-a was detected in AML blast cells, although this appeared to be insufficient to block nuclear translocation of NF-kB, also confirmed by immunofluorescence. In subtype M4 and M5 AML cells a more extensive NF-kB activation and higher IKK activity was found than in M1/M2 specimens. Isolated AML blasts cultured ex vivo responded to external stimulation (TNF/LPS) by further IKK activation, IkB degradation and NF-kB activation. Preincubation with the proteasome inhibitor PSI inhibitied the NF-kB system in isolated AML blasts. This study established for the first time a dysregulation of IKK signaling in AML leading to increased NF-kB activity suggesting potential therapeutic avenues. |
