Strukturelle und kinetische Untersuchungen zur Entwicklung und Optimierung von Hapten-Enzymimmunoassays (ELISAs) am Beispiel der Bestimmung von Triazinherbiziden
| Autor: | Weller, Michael |
|---|---|
| Přispěvatelé: | Nießner, Reinhard (Prof. Dr.), Schuster, Michael (Prof. Dr.), Hock, Bertold (Prof. Dr.) |
| Jazyk: | němčina |
| Rok vydání: | 2012 |
| Předmět: |
ddc:540
Immunoassayentwicklung Antikörperdesign Linker Stabilisierung Pestizide Atrazin Wasseranalytik Trinkwasser Antikörperscreening monoklonale und polyklonale Antikörper Gleichgewichtskonstante Kreuzreaktionen pH-Einfluß Inkubationszeiten Simulation Chemie immunoassay development antibody design linker stabilization pesticides atrazine water analysis drinking water antibody screening monoclonal and polyclonal antibodies equilibrium constant cross-reactivites pH influence incubation times simulation |
| Popis: | Die Kinetik von Hapten-Immunoassays wurde durch Mikrotiterplatten-Experimente sowie Computersimulationen untersucht. Es konnte gezeigt werden, daß stark bindende Tracer meist keine negativen Auswirkungen auf die Empfindlichkeit von ELISAs haben. Es konnte demonstriert werden, daß sog. Brückenantikörper einen Sammelbegriff verschiedener Phänomene bilden. Zum Thema Sensitivität konnte gezeigt werden, daß meist die Affinität des Antikörpers zum Analyten die ultimative Limitierung der Empfindlichkeit darstellt. Es zeigte sich, daß auch die Selektivität eines Immunoassays nur in engen Grenzen verändert werden kann. In Einzelfällen kann der negative Effekt von kreuzreagierenden Substanzen mit höherem pKa-Wert durch pH-Änderung bzw. Protonierung unterdrückt werden. Mit einem neuartigen Screening-Verfahren wurden monoklonale Triazin-Antikörper mit hervorragenden Eigenschaften hergestellt. The kinetics of hapten immunoassays was examined by microtitration plate experiments and computer simulations. It could be shown that strong binding tracers generally do not have negative effects on the sensitivity of ELISAs. It could be demonstrated that so called bridge antibodies are a collective term of different phenomena. In addition, it could be shown that the affinity of the antibody to the analyte is the sensitivity-limiting parameter in most assays. The selectivity could be changed only very moderately. In some cases, a purposeful modification of the cross-reactivity was possible: By change of the pH value, the negative effect of cross-reacting compounds of a higher pka could be largely eliminated. Based on a novel screening method, excellent monoclonal antibodies for the detection of triazine herbicides could be generated. |
| Databáze: | OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
|