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Xenodonor pigs require multiple genetic modifications to provide clinical benefit for human recipients. As the challenge has been to avoid segregation of the required xenoprotective transgenes during breeding, various strategies to assemble a transgene array at a single genomic locus were pursued in this work. Moreover, the major xenoreactive antigens were removed by inactivating the responsible porcine genes via single- and multiplexed CRISPR/Cas9 gene editing. This work further described the generation of a new resource for in vivo genome editing in pigs, a transgenic pig line with ubiquitous Cas9 expression. Xenodonor-Schweine benötigen mehrere genetische Veränderungen, um den menschlichen Empfängern klinischen Nutzen bringen können. Da die Herausforderung darin bestand, die Segregation der notwendigen xenoprotektiven Transgene während der Zucht zu vermeiden, wurden in dieser Arbeit verschiedene Strategien zur Assemblierung eines Transgen-Arrays an einem einzelnen genomischen Lokus verfolgt. Außerdem wurden die Haupt- xenoreaktiven Antigene entfernt, indem die verantwortlichen porzinen Gene durch Einzel- und Multiplex-Geneditierung mittels des CRISPR/Cas9-Systems inaktiviert wurden. Des Weiteren beschrieb diese Arbeit die Generierung einer neuen Ressource für die in vivo Genom-Editierung in Schweinen, eine transgene Schweinelinie mit ubiquitärer Cas9-Expression. |
