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The current Ph.D. thesis consists of two independent parts. The primary section covers establishment of genetic engineering tools and targeted metabolic engineering of the non-conventional oleaginous yeast Trichosporon oleaginosus to generate non-native fatty acids. The fermentative production of these non-native lipids was evaluated based on cheap, renewable carbon sources. The second part of the theses covers the targeted engineering of the bacterial diterpene synthase CotB2 to generate novel diterpene macrocycles. Moreover, Escherichia coli was metabolically engineered to produce the tri-hydroxylated diterpene Cyclooctatin, using a newly identified reductase/ferredoxin system from Streptomyces. afghaniensis (AfR•Afx). The molecular basis for the activity of the AfR•Afx system was elucidated. Die aktuelle Promotionsthese besteht aus zwei Teilen. Im ersten Teil wurde die Öl-Hefe Trichosporon oleaginosus gentechnisch verändert. Es konnten Lipide mit nicht nativer Fettsäurezusammensetzungen hergestellt werden, deren Bildung auf preiswerten, regenerativen Kohlenstoffquellen untersucht wurde. Im zweiten Teil dieser Arbeit wurde gezeigt, dass mit Hilfe von zielgerichteten Strukturmutanten an der Diterpene Synthase CotB2, neue Diterpene Makrozyklen hergestellt werden können. Des weiteren wurde mit Hilfe des neu entdeckten Reduktase/Ferredoxin System (AfR•Afx) aus Streptomyces afghaniensis das dreifach Hydroxylierte Diterpen Cyclooctatin in einem gentechnisch veränderten Escherichia Coli produziert. Die Aktivität des AfR•Afx System wurde molekularbiologisch untersucht. |
