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Es wurde das komplette Expressionsmuster von Toll-like Rezeptoren (TLR) auf humanen Primärkeratinozyten mittels RT-PCR und Immunfluoreszenzfärbung untersucht, was die Expression von TLR1,2,3,5 und 9 ergab. Anschließend wurde die Aktivierbarkeit von Keratinozyten durch S.aureus und seine Zellwandbestandteile (LTA, PGN) im Hinblick auf die Translokation des proinflammatorischen Transkriptionsfaktors NFkB (Transiente Transfektion, Nuclear Extract Gel Shift, Immunhistochemie) untersucht, außerdem die Expression NFkB-kontrollierter Zielgene (IL8, iNOS, COX2) durch quantitative PCR, sowie auf Proteinebene (ELISA, GRIESS-Reaktion) überprüft. In Transfektionsversuchen mit blockierenden monoklonalen Antikörpern konnte abschließend nachgewiesen werden, dass diese Aktivierung eindeutig TLR2-, nicht TLR4- oder PAFR-(platelet activating factor receptor)abhängig ist. Primary human keratinocytes were screened for their expression of toll like receptors (TLR). They were found to express TLR1, 2, 3, 5 and 9 as shown by RT-PCR and immunhistochemistry. Next, the activation of the proinflammatory nuclear transcription factor NFkappaB by S.aureus and its components (LTA, PGN) was analyzed (transient transfection, nuclear extract gel shift, RelA staining). NFkappaB translocation induced the transcription of NFkappaB controlled genes (IL8, iNOS, COX2) as shown by quantitative PCR and was followed by production of increased amounts of IL8 protein and NO (ELISA, GRIESS reaction). Finally, inhibition experiments using monoclonal blocking antibodies unambigously showed that this activation was TLR2 but not TLR4 or PAFR (platelet activating factor receptor) dependent. |
