Rôle des vésicules extracellulaires dans la propagation de l'inflammation et du stress oxydant au cours de la calcification vasculaire

Autor: Yaker, Linda
Přispěvatelé: STAR, ABES
Jazyk: francouzština
Rok vydání: 2021
Předmět:
Popis: Vascular calcification (VC) is a cardiovascular complication in patients with diseases such as chronic kidney disease (CKD). During VC, vascular smooth muscle cells (VSMCs) undergo an osteogenic switch and secrete a heterogeneous population of extracellular vesicles (EVs). The objective of our study is to determine the role and the mechanism of action of EVs in the propagation of inflammation and oxidative stress during the VC process. A macrophage murine cell line (RAW 264.7) was treated either with lipopolysaccharide-EK (LPS-EK) or homocysteine, a uremic toxin that accumulated in body fluids of CKD patients. EVs secreted by these macrophages were then collected by ultracentrifugation and characterized using several techniques (TEM, cryo-EM, NTA, AChE activity, Western Blot CD9, CD81). A murine VSMCs cell line (MOVAS-1) was incubated with these EVs to assess calcification in presence of inorganic phosphate (Pi 4mM, 7 or 14 days). We showed that EVs secreted by LPS-EK-treated macrophages were able to aggravate the VC process via the VSMC osteogenic switch and a pro-inflammatory and pro-oxidative response. Using MS-based proteomic, we demonstrated that these EVs were enriched in pro-inflammatory cytokines and in proteins involved in inflammation (cis-aconitate decarboxylase, CAD), oxidative stress (plasminogen activator inhibitor-1, PAI-1), and VC (serum amyloid A-3 protein, Saa3). EVs derived from homocysteine-treated macrophages were also able to aggravate VSMC calcification but their protein content demonstrated that the mechanism of action is independent of oxidative stress and probably dependant of IL-6. In conclusion, EVs could therefore be an interesting therapeutic target to limit VC in CKD patients
La calcification vasculaire (CV) est un facteur de risque de morbi-mortalité notamment chez les patients atteints d'insuffisance rénale chronique (IRC). Lors de la CV, les cellules musculaires lisses vasculaires (CMLV) changent de phénotype et sécrètent des vésicules extracellulaires (EVs) pro-calcifiantes. L'objectif de notre étude est de déterminer le rôle et le mécanisme d'action des EVs dans la propagation de l'inflammation et du stress oxydant au cours de la CV. Pour cela, une lignée murine de macrophages (RAW 264.7) a été traitée soit avec du lipopolysaccharide (LPS-EK) soit avec de l'homocystéine, toxine urémique accumulée chez les patients atteints d'IRC. Les EVs sécrétées par ces macrophages ont été isolées par ultracentrifugation et caractérisées en utilisant différentes techniques (TEM, cryo-EM, NTA, activité AChE, Western Blot CD9, CD81). Puis, une lignée murine de CMLV (MOVAS-1) a été incubée avec ces EVs afin d'étudier la CV en présence de phosphate inorganique (Pi 4 mM, 7 ou 14 jours). Nous avons montré que les EVs sécrétées par les macrophages traités avec du LPS-EK sont capables d'aggraver le processus de CV via l'induction d'un switch ostéogénique des CMLV et d'une réponse pro-inflammatoire et pro-oxydante. Par une étude protéomique, nous avons montré que ces EVs sont enrichies en cytokines pro-inflammatoires et en protéines impliquées dans l'inflammation (cis-aconitate décarboxylase, CAD), le stress oxydant (inhibiteur de l'activateur du plasminogène-1, PAI-1) et la CV (protéine sérum amyloïde A-3, Saa3). Les EVs sécrétées après traitement par l'homocystéine augmentent également la calcification des CMLV mais leur composition protéique indique que le mécanisme d'action est indépendant du stress oxydant et vraisemblablement dépendante de l'IL-6. En conclusion, les EVs pourraient être une cible thérapeutique intéressante afin de limiter la CV chez les patients atteints d'IRC
Databáze: OpenAIRE
Externí odkaz: