新規の大腸菌buffer使用による,ELISA法でのAMAの特異性の上昇 : PBCとその他の膠原病患者における反応性の相違
| Autor: | IWASAWA, Eriko, MIYAKAWA, Hiroshi, KIKUCHI, Kentaro, NIIMI, Akiko, KAMATANI, Naoyuki |
|---|---|
| Jazyk: | angličtina |
| Rok vydání: | 2008 |
| Předmět: | |
| Zdroj: | 東京女子医科大学雑誌. 78(4):198-204 |
| ISSN: | 0040-9022 |
| Popis: | 抗ミトコンドリア抗体(AMA)は原発性胆汁性肝硬変(PBC)における特異的な血清学的診断マーカーである.しかしながら,PBC以外の疾患でも低頻度ながら検出される.本研究では,細菌内で大量生産されたpML-MIT3蛋白を抗原としたELISAによって各種膠原病350例のAMAをスクリーニングした.21例がカットオフ値を上回った.免疫プロット法による解析では14例にAMAが検出されたので,最終的に膠原病におけるAMA陽性率は4.0%であった.すなわち,他の7例は非特異反応であった.この非特異反応は血清中の非特異的なE.coli由来の抗体と,組み換え蛋白のE.coli組成との交差反応によって惹起されるとの仮説を立てた.そこで,独自のunique E.coli bufferをこのELISA系に加えることによって,膠原病における非特異反応を消失させることができた.結論として,このE.coli bufferの使用はAMA測定系の特異性を有意に向上させることから,ルーチンの血清学的分析のための新しい方法となり得ることが示唆された. Anti-mitochondrial antibody (AMA) is serum hallmark of primary biliary cirrhosis (PBC). However, AMA is also detected in other patients at low frequency. In the present study, 350 patients with various collagen diseases were screened for AMA by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using E. coli overexpressing pML-MIT-3 protein as an antigen. Twenty one serum samples showed values higher than the cut-off. Since immunoblotting revealed 14 samples were to be positive for AMA, the AMA-positive rate was 4.0% (14/350). Therefore, seven sera showed non-specific reactions. We hypothesized that the non-specific reactions were due to cross-reactivity with serum non-specific E. cole-derived antibodies and E. coli components of recombinant proteins. So, we added our original E. coli buffer and succeeded in eliminating non-specific reactions. In conclusion, the use of our E. coli buffer can significantly increase the specificity of the ELISA technique for AMA testing, suggesting novel ways to perform routine serum analysis. |
| Databáze: | OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
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