Purification and characterization of a GH43 β-xylosidase from Enterobacter sp. identified and cloned from forest soil bacteria

Autor: Eleonora Campos, Ángel Adrián Cataldi, Paola Talia, Mercedes Ballesteros Perdices, Felicia Sáez, Paloma Manzanares Secades, Marcela Rorig, Sergio Alberto González, Maria Jose Negro Alvarez, Daniel Grasso, Gonzalo Julián Sabarís Di Lorenzo
Rok vydání: 2013
Předmět:
Zdroj: CONICET Digital (CONICET)
Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
instacron:CONICET
Microbiological Research 169 (2–3) : 213-220 (February–March 2014)
INTA Digital (INTA)
Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria
instacron:INTA
ISSN: 1618-0623
Popis: The use of lignocellulosic biomass for second generation biofuels requires optimization of enzymatic breakdown of plant cell walls. In this work, cellulolytic bacteria were isolated from a native and two cultivated forest soil samples. Amplification of glycosyl hydrolases was attempted by using a low stringency-degenerate primer PCR strategy, using total soil DNA and bulk DNA pooled from positive colonies as template. A set of primers was designed based on Acidothermus cellulolyticus genome, by search of conserved domains of glycosyl hydrolases (GH) families of interest. Using this approach, a fragment containing an open reading frame (ORF) with 98% identity to a putative GH43 beta-xylosidase coding gene from Enterobacter cloacae was amplified and cloned. The full protein was expressed in Escherichia coli as N-terminal or C-terminal His-tagged fusions and purified under native conditions. Only N-terminal fusion protein, His-Xyl43, presented beta-xylosidase activity. On pNPX, optimal activity was achieved at pH 6 and 40°C and Km and Kcat values were 2.92mM and 1.32seg-1, respectively. Activity was also demonstrated on xylobiose (X2), with Km 17.8mM and Kcat 380s-1. These results demonstrated that Xyl43 is a functional beta-xylosidase and it is the first evidence of this activity for Enterobacter sp. Fil: Campos, Eleonora. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentina Fil: Negro Alvarez, María José. Centro de Investigaciones Energéticas, Medioambientales y Tecnológicas; España Fil: Sabarís Di Lorenzo, Gonzalo Julián. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentina Fil: González, Sergio Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentina Fil: Rorig, Marcela. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación de Recursos Naturales. Instituto de Suelos; Argentina Fil: Talia, Paola. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentina Fil: Grasso, Daniel Hector. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación de Recursos Naturales. Instituto de Suelos; Argentina Fil: Sáez, Felicia. Centro de Investigaciones Energéticas, Medioambientales y Tecnológicas; España Fil: Manzanares Secades, Paloma. Centro de Investigaciones Energéticas, Medioambientales y Tecnológicas; España Fil: Ballesteros Perdices, Mercedes. Centro de Investigaciones Energéticas, Medioambientales y Tecnológicas; España Fil: Cataldi, Ángel Adrián. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentina
Databáze: OpenAIRE
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